化痰类中药多途径调节肺间质纤维化抗氧化机制的研究

The idiopathic pulmonary interstitial fibrosis (IPF) is an inscrutable intrapulmonary disease, which is lack of the particular medicine in the clinic. According to the recent research, the oxidative stress plays an important part in the occurrence and development of the IPF. Our experiment mainly discussed the direct anti-oxidation of the expectorant traditional Chinese medicine in vitro, and observed the indirect anti-oxidative mechanism of the IPF on the IPF rat models. In this research, we determined three elements to test the direct anti-oxidation of every medicine, including the overall anti-oxidative activity, the eliminating ability of the free radical, and the peroxiding activity of the lip tropic agent. Sort the medicine in the order of the anti-oxidative ability, and sieve the top ten drugs to carry out animal experiments. Based on the IPF rat models which were caused by the bleomycin, we interfered these models by the medicine, and observed the performance of the lung tissue sections via the electron microscope. Then score on the pathology, and test the expressing content in the pulmonary alveolus lavage of the SOD, GSH, MDA and MUC5AC. Afterwards, detect the PPARs, Nrf2 and TPRV1 mRNA. Following these steps, we could discuss the phlegm Chinese herbs' intervention mechanism of the oxidative stress in rats' lungs; the difference of the anti-oxidative capacity among the different kinds of the phlegm Chinese medicine; the effect of the same drugs on the different syndromes. All of these will provide the basis for the application of the phlegm drugs in the clinical treatment of the IPF.

特发性肺纤维化(IPF)为不明原因的肺间质性疾病，临床缺乏特异的治疗药物。近年研究发现，氧化应激在IPF的发生发展中发挥重要作用。本研究探讨化痰类中药体外直接抗氧化作用，并在IPF大鼠模型基础上观察对IPF的间接抗氧化作用机制。在体外通过进行对总抗氧化活性的测定、自由基清除能力的测定、抗脂质过氧化活性的测定三种方法测试各味药物的直接抗氧化作用。将药物按抗氧化能力进行排序，筛选前10位的药物进行动物实验。在博来霉素所致IPF大鼠模型的基础上，通过药物干预IPF大鼠模型，观察肺组织切片电镜下表现，病理学评分，肺泡灌洗液中SOD、GSH、MDA、MUC5AC表达含量的检测，肺组织PPARs、Nrf2、TPRV1 mRNA 等指标检测，探讨化痰类中药对IPF大鼠肺组织氧化应激反应的干预机制；不同类别化痰中药抗氧化能力的区别；相同药物对不同的证型的作用效果。为临床上应用化痰类药物治疗IPF提供依据。

特发性肺纤维化(IPF)为不明原因的肺间质性疾病，目前临床尚缺乏疗效确切且有针对性的治疗药物。确诊后平均存活期为2年，5年生存率为30％～50％。近年大量研究发现，氧化应激与肺纤维化的发病密切相关，在IPF的发生发展中发挥重要作用，抗氧化治疗策略目前被认为可能会开辟IPF治疗的新篇章。因此本研究主要探讨了化痰类中药对BLM大鼠肺纤维化模型抗氧化抗纤维化的作用。首先通过文献的数据挖掘工作探讨了肺纤维化疾病用药规律，并进行化痰药物桔梗和半夏对大鼠肺纤维化模型的干预作用的动物实验。探讨了博来霉素制作肺纤维化模型的最佳用量和最适宜造模时间。提取各化痰类中药中有抗氧化作用的主要成分，采用DPPH自由基清除率测定的方法，测定了其体外抗氧化活性并进行了排序。使用排序前八位的药物水煎液对IPF大鼠模型进行干预，观察肺组织病理变化，氧化/抗氧化指标变化，炎性细胞因子水平以及对血管新生机制和理化机械刺激相关的离子通道的表达情况，从而探讨中药化痰机制与抗氧化机制之间的关系，比较各药物抗氧化及抗纤维化能力的差异。文献研究发现补气药、活血化瘀药、化痰止咳平喘药、清热药、补阴药5大类药物的累计频率达到69.48％，是构成治疗的主要药物。每类药物排在首位的分别是黄芪、丹参、半夏、黄芩、麦冬。通过关联规则分析发现止咳化痰平喘药常用药对有半夏、甘草；杏仁、甘草；款冬花、紫菀；桔梗、甘草；百部、紫菀；百部、桔梗；枇杷叶、杏仁。模型制作的研究结果显示，采用5mg/kg的剂量进行气管内注射3周后所造成的模型更加符合要求。化痰中药体外抗氧化活性比较得到的结果显示，以天南星、川贝母、海藻、胖大海、半夏、白前、黄药子、前胡的抗氧化活性较高。根据各指标综合评价情况，所选取进行动物实验的8种化痰中药的排序情况：海藻＞清半夏＞白前＞天南星＞前胡＞川贝＞黄药子＞胖大海，以海藻的抗氧化抗纤维化能力最为突出。这些药物均可提高肺组织匀浆中SOD、GSH水平，降低MDA、Nrf2水平，调节机体氧化/抗氧化机制失衡；降低PPARS、TGF-β、TNF-α等炎性细胞因子的水平，改善肺部炎性反应；降低VEGF水平，抑制小血管新生；降低TPRV1，减气道体对外界刺激的反应性，从而起到抗纤维化的作用。中药处方的现代应用除了需要辨证论治，现代药理研究也可以作为我们处方用药的有利依据，使中医中药的应用与时俱进，提高疗效。