Fcα/μR在肠相关淋巴组织B细胞的表达和功能研究

机体大量的IgA和IgM在肠相关淋巴组织（GALT）生成，所形成的粘膜免疫屏障是机体对抗外来病原微生物入侵的第一道防线。在前期工作中，我们发现IgA和IgM的共同受体Fcα/μR表达于GALT的B细胞。目前尚不知道Fcα/μR与粘膜区IgA和IgM表达及其免疫学功能的关系。本课题将从Fcα/μR在人和小鼠粘膜B细胞的表达谱出发，预测该受体是否与IgA和IgM的表达相关。通过小鼠粘膜B细胞和EB病毒转化制备的永生化人肠粘膜B细胞，将进一步在细胞水平上观察Fcα/μR与抗体表达的关系。通过单独交联Fcα/μR或共交联Fcα/μR和BCR，观察B细胞的活化、增殖和凋亡情况。除此以外，已知胞内区删除的Fcα/μR不再能够发生内吞，我们将进一步定位Fcα/μR与内吞有关的基序和寻找辅助Fcα/μR内吞的分子。通过本项研究，将进一步了解Fcα/μR的功能，并有助于了解粘膜免疫机制。

Fcα/μR 是既可以结合IgA 又可以结合IgM 的Fc 受体，表达于多种组织，包括粘膜固有层。本项目期望了解Fcα/μR在肠相关淋巴组织B细胞上的表达并进行受体的功能研究，主要取得了以下结果：（1）我们的前期工作发现人Fcα/μR在粘膜固有层B细胞上表达，推测这些细胞很可能是粘膜来源的IgA和IgM分泌细胞。由于人的粘膜固有层的B细胞难以获得，我们使用了小鼠粘膜B细胞。为了大量获得这些细胞，我们摸索了用粘膜固有层B细胞制备杂交瘤的方法。通过多种免疫方法的改进，我们最终获得了粘膜来源的IgA分泌细胞。但是对其中的细胞做RT-PCR，检测不到Fcα/μR的表达，提示人和小鼠Fcα/μR的表达分布可能存在差异。（2）Fcα/μR的EC2功能域与粘膜上皮表达的pIgR D1功能域具有较高同源性，后者在粘膜上皮细胞表达，也是IgA和IgM的共同受体。为了了解Fcα/μR结构和功能的关系，我们用序列比对和同源建模的方法借用pIgR-D1的晶体结构模拟出Fcα/μR-EC2结构域的空间结构，利用拼接聚合酶链式反应的方法，对所预测的三个CDR样环分别用无配体结合功能的pIgR-D2结构域中的相应CDR样环取代，并制造了定点突变，由此获得了Fcα/μR用于结合IgA和IgM的功能氨基酸位置。结果显示FcR-EC2结构域中三个CDR样环均参与受体对IgA和IgM的结合，相比之下，CDR1和CDR2样环更为重要；位于CDR1区中带正电荷的第31位精氨酸（Arg31）对于IgA和IgM的结合是必需的氨基酸。（3）建立Fcα/μR稳定表达细胞系一直是Fcα/μR研究中的难点。本项工作将Fcα/μR通过脂质体转染肾小球系膜细胞（HMC），成功地在HMC上表达Fcα/μR并建立了稳定细胞株。为进一步研究Fcα/μR的功能以及其与IgA肾病的关系提供了很好的细胞模型。