滤泡调节性T细胞在重症肌无力中的免疫调节作用及治疗潜能研究

Follicular regulatory T cells (TFR) are recently defined CD4+T cell subsets with CXCR5+Foxp3+ phenotype, which locate in the germinal centers to regulate the immune response and play an important role in maintaining immune tolerance. Less is known about TFR cells in the pathogenesis of MG. Our preliminary study had found that the frequency of TFR cells in MG patients is significantly lower than that in healthy controls,and decreased TFR cells in generalized MG compared to ocular MG. On this project,We'll confirm the immunologic characteristics of TFR cells in MG patients and EAMG mice, to explore the funcation of TFR cells in the progression of MG. Meanwhile, scFvFoxp3-9R fusing with Blimp-1 siRNA will be constructed and administered to EAMG mice. By detecting the AChR specific T and B cells response and key components in signaling pathway,the up-regulating of TFR cells and restoration of immune tolerance will be evaluated and the potential role of TFR cells in the pathogenesis of MG will be declared. The immunotherapeutic strategy based on the single-chain antibody-mediated RNAi technology will bring up a new world for treating MG even other autoimmune diseases, with the advantage of high efficiency,specific targeting and low immunogenicity.

滤泡调节性T细胞（TFR）是一类新发现的专职调节生发中心免疫反应的CXCR5+Foxp3+双阳性CD4+T细胞亚群，在维持机体免疫耐受中发挥重要作用，其在重症肌无力（MG）中的作用及机制尚不明确。本课题组前期研究发现：MG患者外周血中TFR细胞频率明显低于健康人群，全身型MG患者的TFR细胞较单纯眼肌型亦明显减少。本项目拟在既往工作基础上，进一步检测MG患者和EAMG小鼠TFR细胞的表型和特性，探讨TFR细胞在MG疾病发生中的作用及其与病情特点的相关性；同时应用单链抗体scFvFoxp3-9R负载Blimp-1 siRNA治疗EAMG小鼠，检测AChR特异性T、B细胞的免疫反应，揭示TFR细胞在MG中的免疫调节机制。单链抗体介导的RNAi技术具有高效、靶向性及低免疫原性的优势，应用这一技术促进TFR细胞克隆扩增的免疫治疗策略，将为MG乃至人类自身免疫性疾病的治疗提供新的思路。

重症肌无力（Myasthenia gravis, MG）是细胞免疫依赖的、体液免疫为主的，及补体参与的神经肌肉接头传递障碍的自身免疫性疾。生发中心（Germinal centers, GCs）及自身抗体的形成是MG发病的重要环节。滤泡调节T细胞(Follicular regulatory T cell，TFR)可以通过抑制TFH细胞的数量和抑制非抗原特异性B细胞的选择来控制生发中心反应。同时，在特异性抗原刺激后，TFR细胞对维持正常数量的浆细胞和记忆性B细胞中起着重要作用。TFR细胞协同表达Bcl-6和Blimp1两种拮抗因子。Blimp1的缺失可显著增加TFR细胞的数量，但对TFH细胞的数量无明显影响。但Blimp1对TFR细胞功能的影响尚不明确。在临床研究中，我们检测MG患者及健康对照组外周血中TFH细胞及TFR细胞的表达频率，在动物实验研究部分，我们首先筛选出能有效抑制Blimp1表达的siRNA，在细胞水平及动物水平研究Blimp1对TFR细胞数量及功能的影响，以及TFR细胞过继治疗EAMG的作用机制。在本研究中，我们发现MG患者外周血中TFR细胞的频率明显低于健康对照组，而TFH细胞的表达频率显著高于健康对照组，直线相关分析显示TFR细胞和TFH细胞呈负相关。动物实验研究部分，我们发现Blimp1缺失的Treg细胞可更多的分化为TFR细胞；TFR细胞通过负向调节TFH细胞间接抑制B细胞表面活化因子的表达及B细胞向浆细胞的分化，进而减少抗体的分泌；Blimp1缺乏导致TFR细胞的免疫抑制功能下降。TFR细胞过继转移可抑制EAMG小鼠T细胞的活化，降低B细胞AKT的磷酸化水平，抑制B细胞分化和活化，减轻生发中心的免疫应答，降低抗体的分泌，改善EAMG小鼠的肌无力症状。我们的研究提示TFR细胞过继治疗有望成为治疗MG的新方法。