p75NTR基因859G>A(Arg245Gln)点突变对Aβ沉积、代谢及其神经毒性作用的影响和机制

神经营养因子受体p75NTR介导了Aβ的神经毒性作用。我们新发现：p75NTR促进Aβ产生，并释放胞外段(p75NTR-ECD)来抑制Aβ沉积；p75NTR基因859G>A(Arg245Gln)点突变增加阿尔茨海默病的发生风险，该位点位于p75NTR-ECD近膜酶切区，且编码的Arg种属间高度保守，推测该突变影响p75NTR-ECD酶切释放而加重Aβ沉积，同时也可能影响p75NTR介导的Aβ产生和神经毒性作用。本项目通过制备重组人859G>A突变型p75NTR，检测其对酶切的抵抗；以腺相关病毒为载体，在培养的p75NTR-/-小鼠皮层神经元转染突变型p75NTRcDNA，观察p75NTR-ECD释放水平；进一步在p75NTR-/-APPSwe小鼠脑内转染突变型p75NTRcDNA，探讨859G>A点突变对Aβ代谢、沉积及其神经毒性的影响和机制。本项目对于揭示AD发生新机制具有重要科学意义。

本研究完成了自然基金申请书中提出的全部任务和目标，探讨了p75NTR基因点突变对Aβ代谢、沉积及其神经毒性的影响和机制。具体研究发现如下：1. 人群p75NTR基因的 SNP筛选及与AD关系的分析研究发现，p75NTR基因的SNP (rs2072446)是散发性AD的危险因素；含该SNP者的脑脊液中p75NTR胞外段（p75NTR-ECD）水平低于不含该SNP者。2.我们构建了野生型及突变型（含SNP突变点rs2072446）p75NTR AAV载体质粒，分别转染培养p75NTR-/-小鼠皮层海马神经元，并加入金属蛋白酶TACE共培养，发现突变型组可抵抗金属蛋白酶酶切，p75NTR-ECD的释放明显减少，表明该SNP抑制p75NTR-ECD的释放；3.将野生型或突变型p75NTR AAV载体进一步转染敲除p75NTR基因的AD转基因小鼠，我们发现突变型组p75NTR-ECD的释放明显减少，脑内皮层和海马Aβ斑的形成显著增多，表明该SNP促进了Aβ的沉积；4.该SNP不影响APP的表达和代谢，不影响α, β和γ分泌酶活性，即该SNP对Aβ的代谢无影响；5. 野生型或突变型p75NTR AAV载体分别转染敲除p75NTR基因的小鼠离体培养海马神经元，并加入MTT共培养，我们发现，突变型组的神经元存活率明显下降，表明该SNP增强了Aβ的神经毒性；6. 野生型或突变型p75NTR AAV载体转染敲除p75NTR基因的AD转基因小鼠后，我们发现突变型组小鼠的认知功能明显下降。上述结果表明，p75NTR基因的SNP(rs2072446) 可阻断p75NTR-ECD的释放，减弱p75NTR-ECD对Aβ沉积的抑制作用，导致Aβ沉积增加、Aβ神经毒性增强和认知功能损害。本研究揭示了p75NTR基因的SNP在AD发病中的作用和机制，对于探讨AD发生发展的新机制，具有重要的科学意义。.本项目发表论文SCI论文1篇，投稿中SCI论文1篇。