雌激素受体α和β活化在自身免疫甲状腺炎发病中的作用研究

雌激素为主要女性激素。其受体（ER）有α和β二种亚型，在生殖、免疫及甲状腺等器官内均有表达，可介导多种生物效应。自身免疫甲状腺炎（AIT）发病以女性为主，并受青春期发育、妊娠和分娩状态影响，原因尚不清楚且无有效防治手段。本课题基于我们既往研究结果，拟利用甲状腺球蛋白免疫小鼠建立AIT动物模型，通过卵巢切除后补充不同选择性ER激动剂及联合应用选择性拮抗剂，直接探讨ERα和β被同时激活或各自单独活化对AIT发病的影响。同时从免疫系统和甲状腺二方面，从免疫耐受、抗原递呈和辅助性T细胞极化与应答角度，系统研究ER活化调节AIT发病的作用机制，并初步探讨介导ER上述作用的信号转导途径。本项目研究将有助于明确AIT女性高发且受生育状态影响的原因，可为进一步探讨与ERα和β有着不同亲和力的各种环境雌激素对甲状腺自身免疫的影响奠定重要基础，为利用相应的ER激动剂或拮抗剂有效防治AIT提供直接的实验依据。

雌激素受体（ER）有α和β二种亚型，在体内广泛表达，介导多种生物效应。为探讨自身免疫甲状腺炎（AIT）女性高发且受生育状态影响的原因，本课题组系统研究了ERα和β活化对AIT发病的影响及相关机制。CBA/J雌鼠在双侧卵巢切除后被分别给予补充选择性α激动剂PPT、β激动剂DPN、对二种亚型亲和力相同的雌二醇（E2）和空白溶剂，并给予甲状腺球蛋白（Tg）免疫诱导实验性自身免疫甲状腺炎（EAT），利用病理学检查、ELISA、流式细胞术、RT-PCR、Western blot、免疫沉淀等方法进行相关检测。补充生理水平E2或较高剂量DPN可使EAT发病率、炎症评分、血Tg抗体滴度显著增高，而PPT组无明显变化，提示ERβ可能是介导雌激素影响EAT发生、发展的主要亚型，其单独活化可促进EAT发生和病情加重。给予E2和选择性ERα拮抗剂MPP联合注射的EAT小鼠甲状腺病理和Tg抗体检测也支持ERβ是介导雌激素影响EAT的主要亚型。我们又从免疫耐受、抗原递呈和辅助性T细胞（Th）极化与应答角度，研究了ER活化调节EAT发病的作用机制。结果显示，给予补充DPN的Tg免疫小鼠脾脏中树突状细胞表面协同刺激信号CD80、CD86的表达明显增加；而且其脾细胞中RORγt、 IL-17A、 IL-21 mRNA表达增多、Th17细胞比例升高。另外，尽管给予PPT注射后Tg免疫小鼠脾脏中调节性T细胞（Tregs）比例以及Foxp3、TGF-β mRNA的表达明显增多，但给予补充PPT或DPN后均可致Tregs表面功能抑制分子GITR表达上升。对那些补充了ER激动剂、未进行Tg免疫的小鼠胸腺检测发现，胸腺细胞亚群或胸腺中Tregs的生成较对照组无显著变化。上述研究提示ERβ活化可能通过引起甲状腺自身免疫反应中Th17/Tregs功能失衡而促进EAT的发生、发展。我们还初步探讨了介导ER上述作用的信号转导途径，发现ERβ在脾和甲状腺内均有表达，ERα仅在脾中表达。利用免疫共沉淀技术发现，ERβ蛋白可能与NF-κB存在直接的相互作用，而后者已被发现对Th17分化有调控作用，进一步提示ERβ活化可影响甲状腺自身免疫反应的发生、发展。本课题研究结果为探讨那些与ERβ有较强亲和力的环境雌激素对自身免疫甲状腺病的影响奠定了重要基础，也为利用ERβ选择性拮抗剂发展防治AIT的新策略提供了直接的实验依据。