反刍动物和工业氢化油反式脂肪酸对内皮细胞功能影响差异及其机理的研究

There may be great difference between the effect of ruminant trans fatty acids (R-TFA) and industrial trans fatty acids (I-TFA) on vascular health ,and this may be due to that 11t18:1 could be metabolized to 9c11tCLA which was good for vascular health. The endothelial cell injury is the start of vascular disease. The project observed the endothelial cell form and detected endothelial cell suvival rate, LDH, MDA, SOD, abhesion molecules (ICAM-1、VCAM-1、PECAM-1、E-selectin）,NOS-NO system and Caspase pathway, to discuss the influence of R-TFA and I-TFA on vascular health; detected the fatty acids of endothelial cell, activity and mRNA expression of △9 dehydrogenase, to discuss the mechanism of effect of two TFA on endothelial cell function. The project elucidated the influence of two TFA on endothelial cell injury and their difference, clarified its reason and molecular mechanism, to guide Chinese dietary.

反刍动物反式脂肪酸（R-TFA）和工业氢化油反式脂肪酸（I-TFA）对血管健康影响存在差异, 这种差异可能是11t18:1在体内可代谢成对血管健康有益的9c11tCLA所引起。内皮细胞损伤是血管损伤的始动因素，因此本课题拟通过二种TFA作用内皮细胞，观察内皮细胞形态、内皮细胞存活率、内皮细胞中脂肪酸、乳酸脱氢酶渗出率、超氧化物歧化酶和丙二醛的变化；检测R-TFA和I-TFA对内皮细胞黏附因子（ICAM-1、VCAM-1、PECAM-1、E-selectin），NOS-NO系统和Caspase通路上蛋白的表达变化，找出R-TFA和I-TFA对血管健康影响的差异。通过内皮细胞中脂肪酸成分变化、11t18:1代谢关键酶及其基因表达的变化，探讨二种TFA对内皮细胞功能影响差异的机理，完善对TFA安全性的认识，可为中国居民的膳食提供理论指导。

反式脂肪酸主要来源于工业氢化油脂及反刍动物相关产品，工业氢化油反式脂肪酸（I-TFA）主要异构体为9t18:1（EA），反刍动物反式脂肪酸（R-TFA）主要异构体为11t18:1（VA）。流行病学研究表明，I-TFA摄入量与CHD的发生呈正相关性，而来源于反刍动物体内的反式脂肪酸R-TFA，是否同I-TFA与CHD具有相似相关性，是否同样需要限制R-TFA摄入的问题仍在进行广泛讨论。因此本实验的主要通过测定内皮细胞中粘附因子，促炎因子,细胞膜受体蛋白TLR4及MAPKs炎症通路上蛋白的表达水平，研究SCD抑制剂（瘦素）和9c11tCLA对不同来源反式脂肪酸引起内皮细胞活力变化和炎症反应的影响；并利用western blot研究了细胞表面炎症反应相关受体蛋白TLR4的表达量，研究TFAs与炎症反应中受体蛋白的关系；试图解释VA与EA造成内皮细胞机理损伤差异的原因，为FA引起心血管方面疾病的病因及其防治提供科学依据。.主要取得了以下研究成果：.1. 11t18:1在内皮细胞中可部分转化生成9c11t-CLA。11t18:1在内皮细胞中可在硬脂酰辅酶A去饱和酶生物作用下生成9c11t-CLA，且转化率达到23.1±0.79%。.2. 9c11t-CLA对内皮细胞中炎症具有调节作用。当与TFAs同时加入9c11t-CLA作用内皮细胞时，TFAs降低细胞活力、抑制NOS-NO系统活化、提高MAPKs蛋白（ERK1/2，JNK1/2，p-38）磷酸化能力、升高ICAM-1、VCAM-1、IL-6等炎症因子mRNA表达量的能力显著降低；说明9c11t-CLA在内皮细胞中具有显著的抗炎作用，且是9t18:1与11t18:1对内皮细胞损伤差异的主要原因。.3. 11t18:1也可诱导内皮细胞炎症反应的发生。当内皮细胞经硬脂酰辅酶A去饱和酶抑制剂处理后，11t18:1降低细胞活力、抑制NOS-NO系统活化、提高MAPKs蛋白（ERK1/2，JNK1/2，p-38）磷酸化能力、升高ICAM-1、VCAM-1、IL-6等炎症因子mRNA表达量的能力显著升高；说明11t18:1作用内皮细胞时，本身并不具有抗炎作用，也可诱导内皮细胞炎症反应的发生。.4. TLR4介导了TFAs诱导内皮细胞炎症反应过程。