Numb在糖尿病肾病内皮细胞转分化中的作用及机制研究

Endothelial injury might play an important role in the pathogenesis of diabetic nephropathy (DN).The effect and mechanism of endothelial mesenchymal transition(EndoMT) in DN were unclear. Studies have shown that Numb is an endocytic protein, which maintaining cell junctions and inhibiting the activation of Notch signaling pathway, yet there has no evidence of the role of Numb in the pathogenesis of DN. Our previous study has found that downregulation of Numb expression disrupted the formation fo cell junction in epithelial cells, which indicated that Numb might prevent the development of DN via inhibiting the development of EndoMT.Therefore,a research will be conducted to explore the role and molecular mechanism of Numb in EndoMT and DN. Firstly, the expression of Numb and the activation of Notch signaling will be dectected during the occurrence of EndoMT and DN.Then, the influnce of downregulating expression of Numb on EndoMT and Notch signaling pathway will be explored. Finally, the changing of the interaction of Numb with VE-cadherin and Notch1 will be dectected. This study will firstly reveal the role of Numb in the development of EndoMT and DN, which will provide a new clue of the pathogenesis of DN and serve to the prevention and treatment of DN.

内皮细胞损伤在糖尿病肾病（DN）发病中发挥重要作用。有关内皮细胞转分化(EndoMT)在DN发生中的作用报道较少，其机制未见报道。研究表明Numb是一种胞吞蛋白，具有维持细胞连接和抑制Notch信号通路的作用，目前尚无Numb在DN发病中作用的报道。而申请者前期研究发现Numb下调表达可延迟肾小管上皮细胞连接复合体形成，推测Numb可能通过抑制EndoMT而阻止DN发生。本课题拟探讨Numb在EndoMT和DN中的作用及其分子机制，首先观察DN大鼠肾小球和EndoMT中Numb表达和Notch信号变化。接着观察Numb下调表达对EndoMT和Notch信号通路的影响。最后观察EndoMT中Numb与VE-钙粘蛋白和Notch1结合力的变化，初步探讨其分子机制。本课题将首次揭示Numb在DN和EndoMT中的作用，为DN发病机制研究提供新线索，为DN防治提供新靶点。

内皮细胞损伤在糖尿病肾病发病中发挥重要作用。有关内皮细胞转分化(EndoMT)在糖尿病肾病发生中的作用报道较少，其机制未见报道。既往研究表明Numb是一种胞吞蛋白，具有维持细胞连接的作用，而申请者既往研究发现Numb 对维持上皮细胞连接具有重要作用，而且Numb可能促进肾小管上皮细胞转分化。然而，有关Numb 在EndoMT 中的作用目前尚未见报道。本研究通过体外研究探讨Numb在EndoMT和糖尿病肾病中的作用。因此，本研究以人肾小球内皮细胞为研究对象，建立高糖诱导的肾小球内皮细胞损伤模型，探讨Numb在肾小球内皮细胞转分化和糖尿病肾病发生发展中的作用。结果显示，肾小球内皮细胞在高糖作用24h后，VE-cadherin mRNA和蛋白表达水平下降，而α-SMA mRNA和蛋白表达水平上升，同时亦发现TGF-β mRNA和蛋白表达水平上升，提示高糖可诱导肾小球内皮细胞发生表型转化，其可能通过上调TGF-β表达上调实现。在上述过程中，Numb mRNA和蛋白表达水平上调，提示，Numb可能在高糖诱导的内皮细胞转分化过程中发挥作用。进而，本研究采用RNA干扰技术下调Numb蛋白表达，发现高糖诱导的肾小球内皮细胞VE-cadherin蛋白表达下降程度减轻，而α-SMA蛋白表达升高程度减轻，提示Numb下调表达抑制高糖诱导的肾小球内皮细胞表现转化过程；同时，Numb蛋白下调后高糖诱导的肾小球内皮细胞TGF-β蛋白表达下降，提示Numb可能通过抑制TGF-β作用而参与调控高糖诱导的内皮细胞转分化过程。本研究首次发现高糖可诱导肾小球内皮细胞转分化，同时首次发现Numb可能促进高糖诱导的肾小球内皮细胞转分化过程，提示Numb可能通过调控肾小球内皮细胞转分化而参与糖尿病肾病的发生发展。本研究为阐明Numb在糖尿病肾病的作用提供依据，为糖尿病肾病的发病机制和治疗提供新的靶点。