基于“治未病”思想以益肾填精法防治癫痫大鼠认知障碍机制研究

Repeated attacks of epilepsy in children can lead to neuronal damage, impacts.cognitive function. Earlier researches had confirmed that enriching kidney essence method based on in Rong Chang capsule capsule can improve cognitive impairment for children with epilepsy or induced epileptic rats ,and had obvious advantages in protecting the damaged nerve cells.Therefore, put forward the following hypothesis: “The enriching kidney essence method based Rong Chang capsule pre-processed can effectively improve the micro environment of hippocampus of epileptic rats, including BBB function and related inflammatory factor expression, achieved the prevention and treatment of epilepsy after nerve injury and cognitive impairment effect.”With hippocampal tissue damage as the breakthrough point, inflammatory reaction and BBB function change as the main line, pentylenetetrazol (PTZ)-kindled model used SD rats, which divided into Divided into normal control group, model group, Rong Chang capsule pretreatment group and Western medicine group.Intervention in 8 weeks after the test: (1) repeated seizures in rats behavior and organizational change hippocampus (DNA fragment analysis);(2) research on the influence of BBB function: ultrastructure observation, permeability test, the expression of claudin-5;(3) the impact on the inflammatory response: the expression of IL-1β, HMGB1 and TGFβ, CCL4 .To clarify mechanism of prevention and treatment of epilepsy after nerve injury by the enriching kidney essence method pretreatment, providing experimental basis for its clinical application.

已知癫痫反复发作可导致神经元损害，出现脑功能受损症状，影响认知功能。前期临床和实验研究已证实，以“益肾填精法”为主的茸菖胶囊对认知障碍的癫痫患儿或致痫大鼠均有改善作用，在保护受损神经细胞方面具有明显优势。故提出如下假说：“以益肾填精法为主的茸菖胶囊预处理可有效改善致痫大鼠海马微环境，包括BBB功能及相关炎性因子的表达，达到防治癫痫后神经损伤和认知损害的作用”。以海马组织损伤为切入点，以炎性反应及BBB功能改变为主线，以SD大鼠建立戊四唑点燃模型，分正常对照组、模型组、茸菖胶囊预处理组和西药对照组。造模同时药物干预8周后检测：①大鼠反复惊厥行为学及海马组织改变（DNA片段分析）；②对BBB功能的影响研究：超微结构观察、通透性、claudin-5的表达；③对炎症反应的影响：IL-1β、HMGB1以及TGFβ、CCL4表达。阐明益肾填精法预处理的防治癫痫后神经损伤机制，为其临床应用提供实验依据。

癫痫反复发作可导致神经元损害，出现脑功能受损症状，影响认知功能。前期临床和实验研究已证实，以“益肾填精法”为主的茸菖胶囊对认知障碍的癫痫患儿或致痫大鼠均有改善作用，在保护受损神经细胞方面具有明显优势，本课题探索性研究致痫大鼠尚未发展至认知障碍前就给予益肾填精法干预，是否可以对延缓或阻止癫痫后的认知损害。研究内容主要有三个实验：茸菖胶囊预处理对致痫大鼠惊厥行为学及海马组织的影响，对致痫大鼠海马BBB损伤的影响及茸菖胶囊预处理对致痫大鼠炎症反应的影响（IL-1β、HMGB1以及TGFβ、CCL4）。结果：（1）行为学实验：茸菖胶囊预防性给药可以提高致痫大鼠惊厥潜伏期，减轻发作程度。茸菖胶囊预处理3组中，低剂量组、高剂量组抗惊厥作用更好；茸菖胶囊预防性给药可阻止或延缓致痫大鼠认知障碍的出现，茸菖胶囊预处理三组作用相当，低剂量组作用可能更稳定；茸菖胶囊预防性给药、西药预防性给药可以改善致痫大鼠海马DNA损伤情况，茸菖胶囊高剂量预处理改善效果最佳，茸菖胶囊低剂量预处理组亦表现出很大可能性。（2）BBB损伤的影响：茸菖胶囊各预处理组大鼠海马BBB超微结构损伤程度均低于模型组，中药各组海马EB 浓度均低于模型组，且中药各组大鼠海马claudin-5表达均低于模型组，推测茸菖胶囊预处理可能通过降低claudin-5蛋白表达修复海马BBB超微结构，改善海马记忆功能，从而达到预防癫痫大鼠认知功能的作用。（3）炎症因子的影响：茸菖胶囊各预处理与模型组相比均可降低海马内IL-1β、CCL4、HMGB1的表达，但尚未表现出降低TGF-β的作用，且茸菖胶囊低剂量预处理在降低IL-1β、CCL4表达上优于高剂量组。综上得出结论：茸菖胶囊预处理可以延长致痫大鼠惊厥潜伏期，减轻致痫大鼠发作程度，阻止或延缓致痫大鼠认识损伤的出现，其机制可能为通过降低海马内炎性相关因子IL-1β、CCL4、HMGB1的蛋白表达，改善BBB通透性，保护BBB结构完整，防止血脑屏障的通透性增加，保护海马DNA损伤有关，起到减少癫痫发作，从而预防认知障碍的出现。本研究的科学意义：1.基于“治未病”思想首次提出益肾填精法并证实其可预防癫痫认知障碍。2.首次从“癫痫——血脑屏障——炎症因子”通路角度出发探讨以益肾填精法的茸菖胶囊预防癫痫后认知障碍的作用机制。3.首次提出了癫痫后认知障碍的临床预防给药方案。