老年大鼠肝脏微环境诱导外源植入干细胞发生衰老的机制研究

老年供肝是解决肝脏移植中供肝匮乏的重要备选方案之一，我们前期研究发现导入外源端粒酶（TERT）的肝干细胞增殖能力旺盛，同时研究表明肝干细胞植入老年供肝可以大大改善供肝质量，提高移植成功率；但是，有文献报道老年环境可以诱导干细胞早衰，逆转这种改善，所以本课题拟在前期工作的基础上研究诱导早衰的机制，将带有外源TERT基因的雄性大鼠干细胞悬液，经示踪剂染色后注射入同系雌性大鼠供肝内建立移植模型，通过检测干细胞衰老指标和Wnt途径蛋白表达，明确老年微环境对植入干细胞衰老的诱导机制。进而应用siRNA技术阻断Wnt途径关键蛋白Wnt16b的表达，检测移植后肝功能指标、缺血再灌注损伤指标、供体肝脏干细胞性别决定基因表达及检测干细胞示踪剂和干细胞衰老相关指标。探讨TERT基因和siRNA双重干预抑制外源干细胞在老年供肝环境内过早衰老的可行性，为提高临床肝脏移植中老年供肝的使用效率提供理论依据和实践基础。

本课题利用病毒携带外源基因、芯片技术、Dil染色示踪技术、免疫组化、real-time PCR、流式细胞仪等技术在体外和大鼠肝移植模型中研究影响老年供肝移植效果的机制。结果发现：1）外源TERT基因的导入可以增强老年供肝在肝脏移植中的抗打击能力，其机制与TERT转入有效抑制移植肝在缺血再关注损伤中的凋亡，及增强干细胞活力有关。2）经肝脏组织基因芯片检测发现：导致外源干细胞发生早衰的相关基因有FoxN1、Wnt6、Wnt7b、Wnt16b等。3）体外培养的干细胞经Dil染色经尾静脉注射入大鼠，肝切片发现干细胞在肝脏滞留并植入的效率很高。4）经肝功能指标、缺血再灌注损伤指标、及β-半乳糖苷酶、β-catenin 、p53、p21等指标检测显示外源TERT可以有效抑制外源干细胞在老年供肝中的早衰。取得成果：SCI论文正式发表2篇；SCI论文收到接收通知3篇；获山东省科技进步三等奖（第2位）。