JAK2/V617F基因突变在骨髓增殖性肿瘤血栓形成过程中的作用研究

Thrombosis is one of the main causes of morbidity and mortality in myeloproliferative neoplasms (MPN) patients. It has been reported that JAK2V617F mutation plays a key role in abnormal differentiation of hematopoietic stem cells (HSCs), as well as in the consequent formation of MPN. Clinical researches also demonstrated that JAK2V617F mutation is a high risk factor for the formation of thrombosis in MPN cases. HSCs can differentiate into vascular endothelial cells (ECs), which then participate in both vascular repair and re-endothelialization of damaged blood vessels. And the fact that whether ECs function well or not is a major factor for vascular endothelium repair or thrombosis. Based on our previous work, in the present study, we used both mouse MPN model and clinical patients to investigate the in vitro and in vivo influence of JAK2V617F mutation on the differentiation of HSCs into ECs, whether the function of ECs differentiated from JAK2V617F-postive HSCs has any defects, and whether these defects influence the repair of injured ECs. We hope this study would clarify if the JAK2V617F mutation in CMPN patients can lead to the dysfunction of vascular endothelial repair, reveal the mechanisms involved in the formation of thrombosis in CMPN patients from the aspect of defective differentiation of HSCs, and provide novel ideas and theoretical basis for antithrombotic therapy in MPN patients.

血栓栓塞是慢性骨髓增殖性肿瘤（MPN）患者致残和致死主要原因之一。近年研究发现MPN患者具有JAK2/ V617F基因突变所导致的造血干细胞(HSCs)分化异常，临床研究证实该突变还是MPN患者血栓形成的高危因素。HSCs可以向血管内皮细胞分化，促进血管内皮修复和血管重建。而内皮细胞功能是否完善是血管血栓形成和血管修复的重要因素。本研究将在前期研究的基础上，通过小鼠MPN动物模型以及临床患者，从体内外研究JAK2/V617F基因突变对HSCs向内皮细胞分化和JAK/STAT信号通路的影响，研究由JAK2/V617F阳性HSCs分化而来的内皮细胞功能是否存在缺陷，并是否因此影响损伤的血管内皮修复，从而阐明CMPN患者是否存在由于该基因突变所导致的血管内皮修复障碍机制，从HSCs分化缺陷这一方面揭示MPN患者血栓发生机理，为该类患者血栓并发症的治疗提供新的思路和理论依据。

骨髓增殖性肿瘤（Myeloproliferative Neoplasms, MPN）是一类发生造血干/祖细胞的克隆性疾病，ET作为骨髓增殖性肿瘤最常见的一种类型，其临床特点是外周血中血小板持续增高，出现血栓或出血并发症，部分患者进展为以骨髓衰竭为主要表现的骨髓纤维化或急性白血病。本研究主要着眼于研究ET临床特征，基因突变以及发病机制，主要包括以下五方面内容：1）我们分析了中国ET患者的临床及分子生物学特点，分析其血栓形成危险因素，验证IPSET-血栓模型在中国ET患者的可行性，并评价此模型对治疗的指导意义，为IPSET-血栓模型指导治疗提供了依据。2）我们在中国ET患者中证实了CALR基因突变在ET的诊断和判断预后中的价值，并发现JAK2 V617F和CALR基因突变与临床特点及预后有关，为基于分子生物学指标的治疗策略提供了初步依据。3）通过研究发现儿童ET患者临床特点及基因突变频谱均不同于成人，儿童患者的基因突变谱比成人更复杂，高通量测序发现了在儿童ET患者中未报道过的重现性突变，为诊断儿童原发性血小板增多症提供了分子依据。4）建立了血液系统特异性表达CALRdel52（I型）和CALRins5（ II型）两类转基因MPN小鼠模型。5）我们的研究显示ET患者骨髓间充质干细胞存在多方面的缺陷，IFNα-2b可影响ET患者骨髓间充质干细胞多种生物学特性及功能，这可能是干扰素治疗ET的机制之一。.综上所述本项目发现中国成人和儿童ET患者的临床特征和基因突变谱系特点，并使用IPSET-血栓模型预测该类患者的血栓形成因素，通过体外实验和转基因动物研究探索了ET的发病机制，为深入研究ET靶向治疗奠定了理论基础。