利用有效因子分离双峰驼诱导多能性干细胞

On based the plateform of gene clone and analysis,stem cell isolation and cell nucleus transplant (clone),we pay attention to the screen and constitute the key factors of bactrim camel induced pluripotent stem cells(iPS),how isolate the iPS of bactrian camel,and compare the biological characteristics between iPS and ES of bactrian camel.The results will enrich the content of animal embrynic stem cell and development biology.

本项目拟在课题组已具备的基因克隆与分析平台、干细胞分离建系平台、细胞核移植（克隆）平台基础上，围绕着建立双峰驼诱导多能干细胞的问题，重点解决双峰驼iPS系诱导关键因子的筛选、组合并分离到诱导多能干细胞（iPS）；比较双峰驼iPS系与已初步建立的双峰驼ES系之间生物学特性的异同，以期获得双峰驼生殖生理的相关基础资料，丰富动物胚胎干细胞和发育生物学的内容，这对保护动物的遗传资质以及发展西北地区生态农业具有重要的实际意义。

双峰驼( Camelus bactrianus )作为西北地区特有的濒危物种，其生理特性特殊，用途广泛。利用诱导性多功能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs)对该物种的种质资源进行保护具有重要的应用价值，同时也丰富了胚胎干细胞和发育生物学的内容。试验前期，通过CRISPR/Cas9技术，定点在双峰驼胎儿成纤维细胞的Nanog基因后敲入了两个报告基因，获得了用于改良iPSC获得方法的基因编辑细胞系；同时，利用逆转录病毒包装经典诱导因子的方法，通过Oct4、Sox2、Klf4、c-Mcy/Oct4、Sox2、Klf4两种组合，对双峰驼胎儿成纤维细胞进行重编程，成功获得了前五代的双峰驼iPS细胞；在iPSC获得过程中，本试验结合RNA-Seq技术，对VPA（丙戊酸）促进双峰驼胎儿成纤维细胞的机制进行了研究，初步探索了在细胞重编程前期VPA的作用机制。通过多年的试验探索，获得了用于后续试验的生物材料，积累了在双峰驼诱导性多能干细胞获得和培养方面的丰富经验，对后期通过多种技术结合来快速分离获得iPS细胞、尝试新的诱导组合方式和重编程机制的研究积累了丰富的经验。