非编码RNA MicF调控假结核耶尔森氏菌耐酸机理研究

近来研究发现非编码RNA(又称为small RNA, sRNA)广泛存在于原核生物，并且具有多种调控功能，对其研究越来越受到关注。肠道致病菌主要通过污染的水和食物等途径传播，抵抗宿主胃部的酸性环境是其成功感染面临的第一道屏障。我们的前期研究发现肠道致病菌假结核耶尔森氏菌编码sRNA的micF基因缺失使其耐酸能力明显增强，本项目将在此基础上，围绕MicF调控病原细菌耐酸过程及机理开展研究。首先采用比较蛋白组学的方法寻找MicF调控耐酸过程的作用靶基因，并通过gfp融合和Northern杂交验证MicF对靶基因的调控；然后检测这些靶基因的突变株对细菌耐酸的影响；最后通过EMSA、RNA structure probing等方法分析MicF调控靶基因的机制，达到阐明MicF抑制耐酸的作用机理的目的。项目的实施将揭示sRNA在肠道致病菌耐酸系统中的功能及作用机理。

假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis, Yp)是耶尔森氏菌属三种人类致病菌之一，在人体之间主要通过污染的水和食物等途径传播。作为肠道致病菌，Yp成功感染需要耐受宿主胃部的强酸性环境，但其耐酸机理并不是十分清楚。近来研究发现小的调控RNA(small regulatory RNA, sRNA)是细菌重要的转录后调控因子，调控细菌生长代谢及毒力等各个方面。我们研究发现sRNA MicF过表达使Yp耐酸能力增强，小蛋白sprotein YPK_2840过表达使Yp耐酸能力减弱，sRNA MicF通过顺式作用调控小蛋白sprotein YPK_2840的表达来影响菌株的耐酸表型。通过构建Yp的Tn插入突变库并进行体外耐酸能力筛选，我们发现几个可能的sRNA参与调控耐酸。此外，通过比较蛋白组学发现sRNA SraG在转录后水平调控YPK_1205与YPK_1206这个操纵子的表达，YPK_1206的编码区（+30 - +38）对于SraG调控其表达是必须的，且不需要Hfq的辅助。顺式编码的sRNA YsrH抑制脂肪酸合成所需基因fabH2的表达，多核苷酸磷酸化酶PNPase参与该调控过程中，且参与介导sRNA YsrH的降解。