Foxp3在CD4+CD25+ Treg诱导的器官移植免疫调节功能中的作用研究

获得移植物特异性的免疫耐受是同种异型器官移植的最终目标。CD4+CD25+ Treg是一种调节性T细胞亚类，它所介导的免疫抑制在移植耐受的诱导和维持中起关键作用，目前认为Foxp3是Treg细胞启动免疫抑制功能的"开关"。本课题应用RNA干扰技术阻断Foxp3表达，通过体外、体内实验多水平、多层次动态比较研究：①有免疫调节功能的CD4+CD25+ Treg和Foxp3 沉默的CD4+CD25+Treg对CD4+CD25-T细胞增殖影响的差别；②有免疫调节功能的CD4+CD25+Treg和Foxp3沉默的CD4+CD25+Trg，Foxp3 mRNA和细胞因子量的差别；③体内实验验证Foxp3 mRNA干扰的效果；④基因芯片技术筛选Foxp3的下游靶基因。旨在明确在CD4+CD25+Treg的免疫调节功能中， Foxp3调控的信号通路中的下游靶基因，为诱导移植物特异性免疫耐受奠定理论基础。

CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）是一类具有免疫抑制功能的CD4+T细胞，它能抑制免疫效应细胞的增殖、活化和效应功能，从而在维持自身免疫耐受和免疫稳态中发挥重要作用。基于Treg细胞的过继免疫治疗被认为是诱导移植免疫耐受最具前景的新手段之一。它的成功实施首先需获得数量足够、纯度较高、功能稳定的Treg细胞。本研究利用免疫磁珠联合流式分选技术获得了高纯度人外周血Treg细胞，并在体外进行了有效的扩增；实验中证实Treg细胞在体外扩增过程中具有不稳定性，会下调核心转录因子FOXP3的表达；进一步通过全基因组测序分析了扩增后的FOXP3+Treg细胞和FOXP3表达丢失细胞基因表达谱的差异，经过严格的筛选标准，我们发现了1843个差异表达基因。其中，1034个基因在FOXP3丢失细胞中较FOXP3+ Treg细胞中表达上调，而809个基因表达表达下调。更重要的是，FOXP3表达丢失细胞失去了原有的Treg基因表达特征，如FOXP3、CTLA4、LGALS3等高表达基因出现下调，而PDE3B、PDE7A、GPD2等低表达基因出现上调。值得注意的是，FOXP3表达丢失后细胞出现Th2基因特征，如转录因子GATA3和 GFI1以及细胞因子IL13。因此，人Treg细胞在体外扩增过程中失去核心转录因子FOXP3表达，同时转化为Th2样的细胞。