非编码RNA-RAGEncR1对移植血管重塑的调控及其分子机制研究

在前一国家自然科学基金项目资助下，我们采用抑制消减杂交(SSH)方法联合cDNA末端快速扩增(RACE)技术，从"沉默"晚期糖基化终产物受体（RAGE）基因表达的血管平滑肌细胞(VSMC)中克隆出差异表达的基因RAGEncR1(基因登录号：FN669608)。初步研究表明，RAGEncR1没有明确开放阅读框(ORF)、属于非编码RNA(ncRNA)，可能与VSMC表型转化、增殖及迁移均有密切关系。本项目中，我们拟建立"敲除"或"过表达"RAGEncR1的VSMC细胞株，研究RAGEncR1对VSMC各种功能的影响；采用cDNA芯片筛选RAGEncR1可能调控的下游基因；建立大鼠自体静脉移植模型，研究"敲除"或"过表达"RAGEncR1对移植血管重塑及其相关基因表达的影响，探讨其作用的分子机制，为临床问题的最终解决提供线索并寻找新的有效干预靶点。

在本项目中我们成功构建“过表达” RAGEncR1基因的真核质粒表达载体和靶向RAGEncR1基因的短发夹环RNA (shRNA) 真核质粒表达载体，并重组慢病毒（Lentivirus）载体；成功转染离体培养的血管平滑肌细胞(VSMC)，获得稳定“过表达” RAGEncR1基因和“沉默” RAGEncR1基因表达的VSMC细胞克隆；通过“过表达”或 “沉默” RAGEncR1表达对VSMC细胞功能的影响；通过大鼠自体静脉移植模型证实Lentivirus载体介导转染RAGEncR1基因的表达载体局部“过表达”RAGEncR1能够抑制移植血管内膜增生，相关基因表达收到明显抑制。证实RAGEncR1与VSMC 表型转化、增殖及迁移均有密切关系，而且参与移植血管的重塑过程，其作用机制可能是通过抑制血管平滑肌细胞相关基因及蛋白产物表达，从而抑制血管平滑肌细胞增殖及移植血管内膜增生。RAGEncR1 可能成为临床上防治移植血管狭窄、闭塞的有效分子干预靶点。