脐血是干细胞高效而廉价的资源库。小双链RNA(siRNA)是近年发现的基因转录后水平抑制因子,体外合成的siRNA具有细胞内天然物同等的活性,在基因治疗研究应用中将以多方优势取代反义寡聚核苷酸。本项目拟建立脐血诱导肝干细胞、祖细胞的体外实验体系,以插入了siRNA p27的逆转录病毒启动子为载体,将siRNAp27感染至培养的细胞中,使之有效扩增。通过连续检测肝和胆管细胞特异性产物-白蛋白和细胞角质蛋白的产生,判断肝细胞的成熟过程与功能活性,通过检测细胞增殖蛋白或DNA合成判断siRNAp27的作用。进一步,将体外扩增的肝祖细胞移植至2-AAF诱导损伤并行部分肝切除的NOD/SCID鼠肝脏,定期检测血清及肝组织中白蛋白、CKs等的产生了解肝细胞移植后在肝内的生长、分化情况,形态学观察和X染色体检测确定移植成功与否和移植细胞在肝内的分布,并长期观察动物存活期和致瘤性,为临床肝细胞移植奠定基础
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数据更新时间:2023-05-31
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