NKT及NK在原发性胆汁性胆管炎不同发展阶段作用机制的研究

Primary biliary cholangitis (PBC) is an autoimmune cholestatic liver disease characterised by progressive destruction of intrahepatic bile ducts. According clinical presentation, PBC is divided into asymptomatic period, symptom stage and early final stage. Effective treatment for PBC are limited because of the difficulty in studying primary immune events during the early, asymptomatic phase of PBC and the obscure in illustrating the autoimmune mechanisms of biliary ductular damage. The innate immune system especially the effector cells, such as of NK cells and NKT cells, plays an important role in the development of PBC. But the mechanism remains unclear. The result of previous studies shown that NK cells may be involved the breakdown of autoimmune tolerance, biliary ductular damage, so as to maintain and promote the development of PBC. Clinical data showed that the ratio of urinary tract infection caused by Escherichia coli is increased, moreover Escherichia coli infect mice can cause the PBC like animal models. The hypothesis suggest that NK and NKT cells may play a different role in initiating the breakdown of innate immune and inducing autoimmune T cell activation in different stages of pathogenesis of PBC. NOD.B6 Idd10/Idd18 mice infected with E. coli developed the animal model of PBC. The immune mechanism of NK and NKT cells as well as their phenotype in different stages of development PBC was analysis. The study NK and NKT cells as well as their phenotype in the development PBC provide a experimental basis for elucidating the pathogenesis of PBC, which is also benefit for the early diagnosis and precise clinical treatment of PBC.

原发性胆汁性胆管炎（PBC）是慢性进展性胆汁淤积性自身免疫性疾病，由于病因未明，缺乏有效治疗手段，严重影响人民生活质量。固有免疫系统尤其是效应细胞NK、NKT细胞在其发展中起重要作用，但具体作用机制不明。前期研究显示NK细胞可能参与破坏免疫耐受，损伤胆小管，维持、促进PBC发生、发展。临床上PBC分无症状、症状和终末前期，推测发病不同阶段NK、NKT细胞及其表型在固有、适应性免疫应答，诱导自身免疫性T细激活、细胞杀伤中发挥不同免疫作用。本研究拟以大肠杆菌免疫NOD.B6 Idd10/ Idd18小鼠，制造PBC模型，通过预先或免疫后分别或同时剔除NK、NKT细胞，系统深入研究NK、NKT细胞及其表型在PBC启动、慢性化阶段，破坏免疫耐受、细胞杀伤机制，并结合临床分期比较，研究NK、NKT细胞及不同表型与疾病分期关系及其免疫发病机制，为早期诊断、指导临床分期精准治疗提供理论依据。

原发性胆汁性胆管炎（Primary biliary cholangitis,PBC）是自身免疫性、慢性进行性胆汁淤积肝病，男女发病比例为 1:9，具有显著的女性发病倾向。随着环境因素变化，促使遗传易感性宿主发病，加之预防无策、治疗手段有限，PBC 日渐成为导致肝硬化等慢性肝病的主要原因。本研究用2OA-BSA免疫 C57/BL6小鼠，通过预先或每周分别或同时给予 NK 细胞抑制剂剔除 NK 细胞，研究NK细胞与PBC发生发展的关系。其次，通过收集PBC患者和正常人外周血，通过免疫磁珠分选分别获得PBC患者和健康患者的NK细胞，利用流式细胞术检测多氯联苯126对PBC患者外周血自然杀伤细胞活性和功能的影响，在细胞水平验证环境异生物PCB126与 PBC 发病的关系。同样采用磁珠分选的方法分选的免疫细胞，利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和荧光原位杂交技术（FISH）定量和定位分析PBC患者和健康对照组免疫细胞中LncRNA XIST表达水平的异同。同时，利用流式细胞术和病理H&E染色分别检测p40-/-CD25-/-小鼠和使用抗生素清除肠道菌的p40-/-CD25-/-小鼠肝脏、脾脏中淋巴细胞亚群比例及数量，以及小鼠肝脏病理情况，探讨肠道微生物对PBC模型小鼠肝脏炎症的影响。本研究还回顾性分析了原发性胆汁性胆管炎合并甲状腺疾病患者的临床特征，唑来膦酸治疗PBC继发骨质疏松症的临床疗效及抗HK-1抗体及抗KLHL12抗体评估PBC患者对熊去氧胆酸的应答。同时，采用高通量测序技术分析PBC，干燥综合征（Sjögren’s syndrome, SS）患者及健康人的粪便，比较SS和PBC患者较健康对照组人群肠道微生物的物种构成及多样性的异同。通过细胞实验和小鼠 PBC 模型的建立，环境异生物质、遗传因素与 PBC 之间的联系得到进一步证实。遗传因素作为不可变因素，只有经外在环境因素的启动下才会发病。环境中常见的细菌和异生物质是自身抗原和自身免疫发生耐受性破坏的潜在诱因，尤其是在 PBC 发病过程中可对免疫细胞产生重要影响。这些结果将为进一步研究人类细菌感染和环境污染与 PBC 发病的关系提供极其宝贵的实验资料，也为此类疾病的早期诊断和不同发病阶段精准治疗提供了理论依据。