应用基因剔除技术研究HLA-DRB1、DQB1基因在变应性鼻炎发病机制中的作用

变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)是最常见的变应性疾病之一，在我国的自报患病率约为11%，其临床症状严重影响患者的生活质量，保守估计全球AR患者超过5亿人，已成为全球性的健康问题。AR是遗传因素与环境因素共同作用的结果，但其具体发病机制仍不清楚。我们在前项国家自然科学基金（基金号30860310）资助下，发现HLA-DRB1*01、HLA-DQB1*05是新疆维吾尔族AR易感基因，HLA-DRB1*11是汉族AR易感基因，本课题拟通过构建目的基因剔除小鼠模型及应用分子生物学技术研究HLA-DRB1、DQB1在AR发病机制中的作用及作用环节，为阐明AR发病机制和本地区AR的基因治疗和发展特异性药物疗法提供一定基础，进而阐明疾病临床表型多样性的本质，为临床个体化治疗提供一定依据，同时也为我国群体多态性研究、人类学研究、疾病相关性研究等提供有价值的科学遗传依据。

变应性鼻炎(allergic rhinitis, AR)是最常见的变应性疾病之一。基于前项国家自然科学基金（基金号30860310）资助下，发现HLA-DRB1*01、HLA-DQB1*05 是新疆维吾尔族AR 易感基因，HLA-DRB1*11 是汉族AR易感基因。本实验采用了实时荧光定量PCR、免疫印迹和免疫组化检测了129Sv小鼠H2-Eb1基因(与人类的HLA-DRB1为同源基因)与H2-Ab1基因(与人类的HLA-DQB1为同源基因)在变应性鼻炎患病模型和空白对照组中鼻黏膜mRNA和蛋白质的表达变化，并检测了两组小鼠血清中Ig E、IL-4和IFN-γ的浓度变化。另外，本实验构建了H2-Eb1、H2-Ab1和H2-Eb1+H2-Ab1基因剔除小鼠模型，在采用普通PCR反应和免疫印迹鉴定三种基因剔除小鼠类型的同时，分别利用这三种模型构建变应性鼻炎疾病模型和空白对照小鼠，探索血清中卵清蛋白特异性Ig E、IL-4和IFN-γ的浓度变化。实验结果显示H2-Eb1基因与H2-Ab1基因在129Sv小鼠变应性鼻炎疾病模型组的鼻黏膜中mRNA和蛋白质的表达明显高于空白对照组，且具有统计学意义。同样实验结果还显示出在敲除H2-Eb1基因与H2-Ab1基因鼠群的疾病模型中，变应性鼻炎症状的评分明显低于野生型小鼠，且卵清蛋白特异性Ig E和IL-4的ELISA数据反映出单基因敲除鼠群的疾病模型数值低于野生型小鼠疾病模型，而IFN-γ的疾病模型数值高于野生型小鼠疾病模型，为敲除H2-Eb1基因或者H2-Ab1基因可以缓解小鼠的变应性鼻炎症状提供了实验数据。本项目阐明了HLA-DRB1基因和HLA-DQB1基因不仅是人类变应性鼻炎的易感基因，其小鼠同源基因也可能是小鼠变应性鼻炎的易感基因之一；为变应性鼻炎发病机制研究提供了新的思路；为今后的治疗提供了新的靶点；同时，为以后的变态反应动物实验提供了新的敲除基因动物模型。