乙型肝炎病毒e抗原调节免疫细胞功能的作用及机制研究

乙型肝炎病毒E抗原是HBV的一个主要抗原成分，与机体的免疫细胞有充分的接触，众多证据显示可能在机体对HBV产生的免疫应答，尤其是导致免疫耐受过程中发挥了重要的调节作用，但其作用环节和机制目前认识极为有限。我们近期研究发现HBeAg能够下调人外周血单个核细胞的TLR2受体表达，上调PD-1和PD-1L分子，降低免疫细胞的细胞因子分泌水平。本课题拟进一步从免疫细胞表达的受体、表面分子以及产生的细胞因子等多环节，研究HBeAg对树突状细胞、NK细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞等免疫细胞功能的调节作用，综合分析HBeAg对天然免疫和特异性免疫应答的影响，并筛选出HBeAg调节功能最显著的结构区域和特异性T细胞表位肽。其研究结果不仅阐明HBeAg对免疫细胞的调节作用极其机制，而且能够更"立体化"揭示天然免疫和特异性免疫之间的协调机制在HBV感染预后转归中的重要意义。

HBV感染的转归与固有免疫和特异性免疫的协调应答强度密切相关，HBeAg是HBV分泌至血循环中的可溶性蛋白，与免疫细胞有充分的接触，在HBV持续感染过程中发挥了重要的免疫调节作用。本课题围绕HBeAg是否对人免疫细胞具有调节作用，以及HBeAg对免疫细胞调节的途径和机制为目标，重点研究了HBeAg对人外周血单个核细胞来源的免疫细胞的调节作用，HBeAg对THP细胞株的细胞表面分子及其mRNA表达的影响，HBeAg对Toll样受体（toll-like receptors，TLRs）及其信号通路的影响，HBeAg对转录因子NF-κB(p65)入核和细胞因子产生的影响，以及HBeAg特异性T表位肽的筛选。. 研究结果显示：①HBeAg对人外周血单个核细胞，树突状细胞均有抑制TLRs、活化共刺激分子如CD86和HLA-DR的表达，也抑制其mRNA的产生，同时上调抑制性共刺激分子如PD-L1的表达以及mRNA的产生； HBeAg对免疫细胞的调节作用与剂量和作用时间有关联。②HBeAg的调节作用主要是通过TLRs受体及其MyD88依赖信号通道，抑制核转录因子NF-κB(p65)入核，以及细胞因子的产生。③HBeAg能够抑制CD3+CD4+淋巴细胞内特异性IFN-γ表达以及细胞因子IL-2及IL-17的分泌，但上调IL-10的分泌。④高剂量HBeAg对人单个核细胞源DC的诱导分化及成熟有抑制作用，并与剂量有关联。⑤通过THP-1细胞株验证HBeAg对人免疫细胞的调节，其结果显示HBeAg能够下调CD14+的THP-1细胞TLR2和TLR4及其mRNA的表达。. 由此可见，HBeAg不仅是HBV产生的一种抗原成分，HBeAg能够对机体固有免疫和特异性免疫应答环节均产生抑制作用。因此，血循环中高水平的HBeAg是产生特异性免疫抑制和造成HBV持续感染的重要因素。