不同有效成分群组合效应研究山绿茶抗非酒精性脂肪肝药效物质基础及其效应成分分析

三萜、皂苷、黄酮及酚酸类成分是常见的天然活性成分，植物体中常共存。现代研究认为，中药药效的发挥是多种有效成分群按照最佳比例组合的结果。我们前期研究表明山绿茶总提物及相关部位均能有效阻断非酒精性脂肪肝（NAFLD）发展过程。本项目以山绿茶为研究对象，以抗NAFLD药效物质基础为研究目标，借助不同采收时间山绿茶各类化合物含量差异形成的"天然配比"，通过谱效关系研究，明确其药效物质基础及三萜、皂苷、黄酮、酚酸各类成分的作用机制，以及不同配比对于相互间体内吸收、药效的影响。建立新型的质量评价体系，以此选择能发挥最佳药效的采收时机。该项目的研究有望阐明山绿茶中效应物质成分的作用机制及构效关系；评价三萜、黄酮、皂苷及酚酸等成分在抗NAFLD中的作用机制，并探索天然成分联合使用治疗NAFLD；为山绿茶及冬青属其他中药资源（如毛冬青，苦丁茶等）的综合利用提供理论依据。

山绿茶为冬青属海南冬青(Ilex hainanensis Merr.)的干燥叶，前期研究表明其总提物及相关部位能显著改善非酒精性脂肪肝（NAFLD）的发生和发展。本项目结合现代化学，分析学、药理学、生物学等多学科理念方法和技术，阐明山绿茶抗NAFLD的药效物质基础及作用机制。首先，建立了同时测定山绿茶中不同成分的HPLC方法，探讨山绿茶不同采收期样品中各类成分的含量变化规律，黄酮与酚酸类成分在三、四、十、十二月份含量较高，而总三萜在五至八月含量较高，但总皂苷含量变化趋势相反；按照优化工艺，选取差异最大的三批样品制备成“天然配比”进行药效学研究，结果显示不同配比的提取物通过不同的途径达到抗NAFLD的作用。其中，山绿茶总三萜和冬青素A可通过调节PPARα和CYP2E1的表达来改善肝脏脂质调节、胰岛素抵抗和炎症反应，从而改善NAFLD，提示冬青素A可能是山绿茶抗NAFLD的物质基础之一。此外，建立了LC-MS方法测定大鼠血浆中绿原酸、山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和冬青素A的浓度。在灌胃山绿茶提取物后，三个成分在正常大鼠与NAFLD大鼠血浆中的药代动力学参数显著不同。给药后三个成分在NAFLD大鼠血浆中的 AUC 和 Cmax 均降低，而Vd 和 CL 显著增强，为山绿茶的临床用药提供依据。同时，采用代谢组学方法，运用UPLC-Q-TOF-MS对大鼠尿液中代谢谱进行检测，推测出NAFLD生物标志物22个，涉及到三羧酸循环、嘌呤代谢及多巴胺代谢等多个代谢通路。本项目为山绿茶的综合利用提供了理论依据，并为进一步开发有自主知识产权的新药奠定了基础。.本项目共发表文章8篇，其中6篇为SCI论文，申请专利一项。培养博士生1名，硕士生4名，按期完成了计划书中的所有指标。