基于HMGB1/TLR4信号通路探讨平肝止痫复方干预大鼠难治性癫痫的神经免疫调控机制

Refractory epilepsy treatment is the problem of modern medicine. Its incidence and neuroimmunomodulation network imbalance closely. Refractory epilepsy treatment is the problem of modern medicine. Its incidence and neuroimmunomodulation network imbalance closely. HMGB1/TLR4 signal transduction pathways involved in the regulation by the proliferation of activated microglia,and play a key role in the occurrence and development of refractory epilepsy.Therefore, the intervention against the signaling pathway is an important breakthrough in the treatment of refractory epilepsy. This project study the regulatory mechanism of HMGB1/TLR4 signaling pathways based on the kainic acid refractory epilepsy rats model by the the Pingganzhixian Chinese medicine compound joint CBZ alone and integrated therapy. These changes in multiple molecule expression in hippocampal tissue and neurons are detected by RT-PCR, Western-blot by this signal path. Through genetic and molecular level, studies the regulation mechanisms of neural immune during the development of epilepsy, tries to reveal antiepileptic mechanism and hippocampal neurons protective effect based on the kainic acid refractory epilepsy rats model by the the Pingganzhixian Chinese medicine compound joint CBZ therapy, and provides experimental evidence for Pingganzhixian Chinese medicine compound.

难治性癫痫的治疗是现代医学的难题，其发病与神经免疫调节网络失衡有密切关系。.HMGB1/TLR4 信号转导通路通过参与调节小胶质细胞的增殖活化，在难治性癫痫的发生.发展过程中起关键作用，故针对该信号通路进行干预是难治性癫痫治疗的重要突破口。.本课题在前期研究基础上，以 HMGB1/TLR4 信号转导通路为研究靶点，以平肝止痫复方.单独或联合卡马西平为干预因素，建立海人酸难治性癫痫模型大鼠，应用 RT-PCR、.Western-blot 等技术检测海马组织及海马神经元细胞在此信号通路中多个分子表达.的变化。从基因与分子水平研究难治性癫痫发生发展过程中的神经免疫调节机制，.试图揭示平肝止痫复方联合卡马西平对难治性癫痫大鼠的抗癫痫机制和海马神经元.细胞的保护作用，为平肝止痫复方的作用机理提供实验依据。

本研究在理论上提出“引动肝风，风痰上逆，横窜经络，阴阳不相顺接，清阳蒙蔽”是难治性癫痫发病的基础，结合前期实验研究逐渐形成癫痫中医“从肝论治，兼以清心化痰”理论，总结出平肝熄风止痫为本病治疗大法，并对前期实验宁痫复方进行加减，从而化裁出平肝止痫复方进行临床与实验观察，临床上取得较满意疗效。实验研究方面，首先观察了难治性癫痫大鼠对HMGB1/TLR4 信号通路的影响及平肝止痫复方的干预作用，结果显示：（1）海人酸难治性癫痫大鼠炎症相关因子表达水平显著上调，说明炎症可能是难治性癫痫的发病机制之一。（2）平肝止痫复方联合卡马西平能降低海人酸难治性癫痫大鼠海马组织HMGB1、TLR4mRNA的相对表达量，显著下调海马组织异常升高的HMGB1、TLR4蛋白表达量；平肝止痫复方联合卡马西平能降低难治性癫痫大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平。提示平肝止痫复方联合卡马西平用药后可通过减少炎症因子释放，抑制胶质细胞活化，减少HMGB1释放，抑制HMGB1/TLR4炎症信号通路的传递，从而减少炎症因子释放，抑制神经元异常兴奋，达到保护神经元，发挥抗癫痫作用。 其次，通过建立癫痫细胞模型（Sombati细胞模型）以研究平肝止痫复方含药血清对细胞HMGB1/TLR4 信号通路相关蛋白和基因表达的调控机制。结果显示：（1）通过TUNEL法测得平肝止痫复方含药学清干预后模型细胞的凋亡指数与未干预组相比显著降低，其中中西医结合治疗组比中药治疗组或西药治疗组凋亡指数显著降低。在凋亡相关蛋白表达上，平肝止痫复方联合卡马西平能够显著影响bax，bcl-2蛋白的表达，对于caspase族蛋白的影响不大。（2）平肝止痫复方联合卡马西平能够通过干预HMGB1/TLR4 信号通路，明显减少难治性癫痫神经元的细胞凋亡，降低凋亡的速率与频率，保护神经元，可以协同卡马西平干预难治性癫痫具有更好的疗效。本研究为该方的进一步研究提供了理论和实验依据。通过本课题研究培养人才2人，其中教师2人，硕士研究生3人；完成科研学术论文10篇，硕士毕业论文3篇。