褐绒盖牛肝菌深层发酵合成茶氨酸的代谢机理研究

茶氨酸在生物体内具有重要的生理、生化功能和药理、保健作用，开发应用前景广阔。目前报道茶氨酸仅少量天然存在于茶树、茶梅和褐绒盖牛肝菌中。为了开辟茶氨酸绿色生物合成的新途径，我们将首先实现褐绒盖牛肝菌的液态深层发酵，并基于我们已建立的快速、准确的茶氨酸合成酶活性毛细管电泳法检测体系，从褐绒盖牛肝菌中分离纯化具有相应酶活性的蛋白质组分，经N端部分测序和反向PCR克隆其基因。同时，通过简并PCR扩增并克隆可以催化茶氨酸合成的谷氨酰胺合成酶、γ-谷氨基甲酰胺合成酶和γ-谷氨酰基转肽酶的cDNA序列。经序列比较、异源表达和活性分析，弄清褐绒盖牛肝菌中茶氨酸合成关键酶与已知具有类似活性的四种酶之间的关系。这不仅有助于我们理解茶氨酸合成的代谢机理，而且基于同源映射作用为茶树中难以克隆的茶氨酸合成酶基因提供理论指导，利于解决这一长期困扰茶学界的重大基础难题。