糖肾方通过sEH/EETs调节NF-κB炎症通路治疗糖尿病肾病机制研究

糖肾方是课题组在总结前人治疗糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN）经验基础上形成的中药复方。多中心临床试验和药效学研究证实糖肾方对DN疗效确切，但其作用机制尚未明确。预实验发现，糖肾方能够抑制可溶性环氧化物水解酶（sEH）和NF-κB亚单位p65 mRNA表达。sEH通过上调环氧二十碳三烯酸（EETs）水平，抑制NF-κB炎症通路激活，从而具有肾保护作用。本课题拟结合体内外实验，研究DN发生发展中sEH/EETs调节NF-κB炎症通路的作用，在此基础上探讨糖肾方对其调控机制，并分析糖肾方对sEH基因启动子不同区域活性的影响，明确糖肾方治疗DN的作用靶点，为研发治疗DN的现代中药提供科学依据。

最新研究发现，炎症反应是导致糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN）持续发展的关键因素。核转录因子-κB（nuclear factor-κB, NF-κB）信号通路是炎症信号主要传导通道之一，可溶性环氧化物水解酶 (soluble epoxide hydrolase, sEH)/环氧二十碳三烯酸( epoxyeicosatrienoic acids, EETs)通过NF-κB起到调节炎症反应的作用。糖肾方是课题组在总结前人治疗DN经验基础上形成的中药复方，多中心临床试验和药效学研究证实糖肾方对DN疗效确切。课题组前期结果证明，糖肾方能够抑制炎症通路NF-κB亚单位p65 mRNA和sEH mRNA表达，由此课题组提出假说：调控sEH/EETs通路改善DN炎症状态是糖肾方治疗2型DN的重要环节。.基于此研究假说，我们首先开展了糖尿病肾病患者肾组织样本sEH表达与疾病进展的相关性研究，继而利用构建的sEH编码基因EPHX2野生型和突变型重组质粒探讨其参与炎症反应的机制，在此基础上利用高脂饮食合并链脲佐菌素（STZ）诱导的2型DN模型大鼠，分析糖肾方调控NF-κB信号通路减轻肾脏炎症反应的作用机制；引进耶鲁大学Luciferase reporter信号通路筛选平台，评价了糖肾方不同提取方法、配伍组合及其中单体化合物对糖尿病肾病相关信号通路的干预作用，以及糖肾方对EPHX2启动子活性的影响，以期发现糖肾方干预炎症通路的有效成分。.研究发现：sEH在糖尿病肾病患者肾组织表达显著升高，且与尿蛋白水平呈显著正相关；体外研究证实sEH编码基因EPHX2的高表达加剧了炎症反应，其机制与调控PPAR及PPARγ有关；动物实验显示，糖肾方下调NF-κB信号通路减轻肾脏炎症反应是其作用关键机制；信号通路研究结果表明糖肾方干预炎症通路的有效组分为方中的黄芪、枳壳、大黄及卫矛，单体化合物为毛蕊异黄酮苷。这些发现为sEH在糖尿病肾病中的功能研究提供了新思路，也为进一步优化糖肾方处方、明确机制、提高疗效奠定了基础。.在国家自然科学基金资助下，经过项目组成员4年的努力，项目组发表论文29篇，其中SCI收录论文8篇，中文核心期刊论文21篇，结合前期的研究成果,获得北京市科技进步二等奖1项，中华中医药学会科学技术一等奖1项，超额完成课题任务。