免疫抑制因子MNSF-beta在胚胎着床中的作用机制

MNSF-beta是机体内天然存在的一种非抗原特异性的免疫抑制因子，具有抑制T、B细胞增殖和IgG合成的功能；后又发现在小鼠胚胎着床期间，子宫内膜组织中也大量合成分泌该蛋白分子。本实验室在前期研究工作中观察到，抗MNSF-beta抗体在小鼠体内能特异性地抑制胚胎着床，并能影响一系列分别参与调节免疫反应、能量代谢或细胞增殖分化的基因的表达，但其确切的作用机制仍不清楚。本项目拟应用基因过表达、RNA干扰和条件型基因敲除等技术，分别建立相应的细胞和动物模型，离体和在体观察MNSF-beta基因表达水平的变化对胚胎着床、胎儿发育和淋巴细胞功能的影响，并检测分析人子宫内膜基质细胞和人胚胎体外着床过程中MNSF-beta的表达模式，以期进一步揭示MNSF-beta在胚胎着床中的作用机制。

MNSFβ是一种具有非抗原特异性免疫抑制功能的淋巴因子，推测其可能与母胎间免疫耐受的形成有关。本课题研究分析了MNSFβ在妊娠过程中的作用机制；并对MNSFβ在人蜕膜、绒毛和胎盘组织中的表达情况，及其与子宫内膜异位症和反复自然流产的相关性进行了初步探讨，取得的主要结果如下：1、MNSFβ在小鼠体内广泛表达，并在子宫和卵巢组织呈高表达；MNSFβ在小鼠胚胎围着床期子宫组织中的表达具有动态性变化，其在非着床位点的表达水平高于着床位点；在小鼠成熟卵子、2-细胞期早胚和囊胚中，也有MNSFβ蛋白的表达。2、小鼠囊胚在体外与子宫内膜基质（ESC）细胞共培养过程中，囊胚和ESC细胞均表达MNSFβ蛋白，而且随着囊胚的粘附和铺展生长，MNSFβ蛋白的阳性信号逐渐增强；抗MNSFβ抗血清可有效抑制小鼠囊胚对ESC细胞粘附和铺展生长，且呈剂量效应关系。3、上调或下调人HCC-94细胞合成分泌的MNSFβ蛋白水平，通过旁分泌途径作用于体外培养的小鼠外周血淋巴细胞后，能促进小鼠淋巴细胞合成分泌IL-4，并抑制TNFα的分泌，提示MNSFβ可能参与母胎界面免疫耐受状态的形成。4、获得杂合型缺陷（MNSFβ+/-）小鼠，但未能获得纯合型MNSFβ-/-小鼠，提示MNSFβ基因的纯合缺失是胚胎致死的；实验结果证实，MNSFβ基因缺陷会导致小鼠生育能力明显下降，且子代雌、雄比例失调。5、雌性MNSFβ+/-小鼠生育力的降低主要是由于妊娠维持过程中胚胎发育的异常和丢失造成的，表现出与人自然流产相近的表型；MNSFβ+/-孕小鼠子宫中发育异常胚胎的MNSFβ表达水平也显著下降，提示MNSFβ可能在胚胎的发育过程中发挥重要作用。6、与野生型小鼠相比，MNSFβ+/-小鼠胸腺中MNSFβ蛋白的表达水平显著降低，但脾脏、淋巴结和胸腺中各类淋巴细胞的组成和分泌功能没有显著差异；MNSFβ+/-小鼠子宫子宫组织中CCL-5和CXCL-12蛋白的表达水平明显低于野生型小鼠，提示MNSFβ可能参与调控母胎界面的免疫功能。7、人孕早期蜕膜、绒毛和胎盘组织中均有MNSFβ的表达，初步实验表明，反复流产患者脱膜组织中可能存在MNSFβ蛋白的异常低表达现象。上述研究结果提示，MNSF在小鼠妊娠过程中发挥重要作用，并可能参与调控母胎界面的免疫功能，与人反复自然流产有潜在的相关性，是发展新型生育调控技术的潜在靶分子。