基于组蛋白去乙酰化酶研究香加皮有效成分抗心肌肥大作用及其表观遗传调控机制

Myocardial hypertrophy is one of the early performance of heart failure, reverse myocardial hypertrophy has become one of the important goals about the treatment of high blood pressure and congestive heart failure..The cardiotonic effect of Cortex Periplocae has been well known which often be used in the treatment of heart failure, but whether it has the action against myocardial hypertrophy seldom-reported ..Based on the previous work, we will copy the rat myocardial hypertrophy model, investigate the effective composition of Cortex Periplocae influence the index as: model rat heart index, heart histology, expression of hypertrophy factors and myocardial apoptosis, and clear its action against myocardial hypertrophy;Use angiotensin-converting enzyme Ⅱ inducement method to copy in vitro model of myocardial hypertrophy, and investigate the action of effective composition of Cortex Periplocae against myocardial hypertrophy;A lot of research shows that myocardial hypertrophy is closely related to the high level of histone acetylation, we will investigate the effective composition of Cortex Periplocae influence the level of myocardial histone acetylation and examine its effection to the histone acetylation activation and the influence of histone acetylation about the Gene promoter regions that myocardial hypertrophy factor enzyme is related, .From the overall, cell ,molecular and transcription level to clarify the epigenetics mechanism of the effective composition of Cortex Periplocae can regulate myocardial histone acetylation level and against myocardial hypertrophy. Lay experimental basis for development of drugs about Cortex Periplocae treat myocardial hypertrophy and heart failure.

心肌肥大是心力衰竭发生的一种前期表现，逆转心肌肥大已成为当前治疗高血压及慢性充血性心力衰竭的重要目标之一。香加皮常用于心力衰竭的治疗，其强心作用已被人们所熟知，但其是否具有抗心肌肥大作用鲜有报道。在前期工作基础上，本课题拟复制大鼠心肌肥大模型，考察香加皮有效成分杠柳毒苷对模型大鼠心脏指数、心脏组织学、肥大相关因子表达及心肌细胞凋亡等指标的影响，明确其抗心肌肥大作用；利用血管紧张素酶Ⅱ诱导法复制体外心肌肥大模型，考察香加皮有效成分抗心肌肥大作用；大量研究表明心肌肥大与组蛋白高乙酰化水平密切相关，本课题拟考察香加皮有效成分对心肌组蛋白乙酰化水平的影响，同时检测其对组蛋白去乙酰化酶活化及心肌肥大因子相关基因启动子区域组蛋白乙酰化的影响，从整体动物、细胞、分子及转录水平阐明香加皮有效成分调控心肌组蛋白乙酰化水平抗心肌肥大的表观遗传学机制。为阐明香加皮治疗心肌肥大及心力衰竭药物的研发提供实验依据。

香加皮临床常用于心力衰竭的治疗，其强心作用已被人们所熟知，但其抗心肌肥大作用及其作用机制鲜有报道。.鉴于逆转心肌肥大已成为当前治疗高血压及慢性充血性心力衰竭的重要目标之一。在前期工作基础上，本课题复制大鼠心肌肥大模型，考察香加皮有效成分杠柳毒苷对模型大鼠心脏指数、心脏组织学、肥大相关因子表达及心肌细胞凋亡等指标的影响，明确其抗心肌肥大作用；利用血管紧张素酶Ⅱ诱导法复制体外心肌肥大模型，考察杠柳毒苷对心肌细胞凋亡的影响及其抗心肌肥大作用；考察杠柳毒苷对心肌组蛋白去乙酰化酶活化及心肌肥大因子的影响。从整体动物、细胞、分子及转录水平阐明香加皮有效成分调控心肌组蛋白乙酰化水平抗心肌肥大的表观遗传学机制。.本研究主要得到以下结果与结论：.1. 本研究确定的制备工艺使杠柳毒苷的含量达到90%以上。杠柳毒苷制备工艺稳定、经济、重复性好。.2. 超声心电图结果显示，杠柳毒苷2mg/kg剂量组小鼠EF%、FS%值较模型组有升高趋势，具统计学意义(p<0.05)。此外，与ISO组比较，杠柳毒苷能降低心脏重量指数，其中以杠柳毒苷2mg/kg组最明显，但无统计学差异（P>0.05）。.杠柳毒苷1mg/kg组显著降低心肌肥大小鼠血清中CK(P<0.01)，降低LDH、AST水平(P<0.05)，提高心肌组织中SOD(P<0.01)，降低MDA(P<0.01)。并且病理切片可见损害较模型组减轻。.杠柳毒苷对ISO诱导小鼠心肌肥厚具有保护作用，其机制可能与清除氧自由基，提高抗氧化能力，调节ANP、BNP和β-MHC的表达水平的表达有关。.3.培养新生大鼠心肌细胞，构建H9C2心肌肥大体外模型。体外实验表明杠柳毒苷对H9C2有杀伤作用并可能与诱导细胞凋亡相关。.杠柳毒苷能抑制H9C2心肌肥大过程中的蛋白含量（P＜0.05），减少心肌细胞体积。0.0625、0.125μg/ml组减少H9C2细胞LDH（P<0.01）。.提示杠柳毒苷能够抑制AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞肥大。.4. 杠柳毒苷抑制AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞肥大因子ANF、BNP的表达(P < 0.05)。.Western Blotting方法考察杠柳毒苷组心肌细胞中组蛋白H3乙酰化修饰水平略低于空白对照组，但差别无统计学意义（P>0.05）。.杠柳毒苷可抑制AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞中HATs 活性和组蛋白H3乙酰化修饰水平。