“基于‘感觉神经肽SP与MC预激联动’假说”—穴位埋线降低变应性鼻炎复发率的作用机制探索

The study is the deepening and the development of National Nature Science Foundation Project in 2012 of ‘Regulatory Effects of Caught Implantation at Ying-Xiang acupoint on Neurogenic Inflammtaion via axon reflex in Allergic Rhinitis’, and the "International technology cooperation and exchanges projects of a companion research between China and Singapore -"the curatve effects of the catgut implantation in the treatment of AR " in 2013. On the preliminary clinical study, we found that the catgut implantation could prolong the periods of remission and reduce the recurrence rate of AR. On the fundamental research, we found the expression of sensory neuropetides substance P (SP) could be suppressed effectively through catgut implantation. But there was no direct relationship between the effectiveness and mechanism. There was a big gap in mechanism evidence chaining. Through the literature review we found MC priming was the important factor to bridge the gap .So we proposed the hypothesis of SP expression and MC priming linkage. We would investigate the correlation between SP expression and MC priming by RTAC, the analysis of inhibition level of MC priming by catgut implantation. the effectiveness of recurrence rate in rats model by acupoint catgut implantation. To investigate the mechanism of reducing the relapse rate of AR by catgut implantation.

本研究是对我们2012年国家自然基金“穴位埋线经轴索反射对变应性鼻炎（AR）神经源性炎症的调控机制”、2013年四川省国际科技合作与交流研究计划“穴位埋线治疗变应性鼻炎的临床疗效及安全性的中新合作研究”的深化与拓展。在前期临床研究中我们发现穴位埋线能有效延长AR缓解期，降低复发率；基础研究中我们发现穴位埋线能够有效抑制感觉神经肽P物质（SP）的表达。但二者却没有呈现直接性的因果关系，机制链接出现明显的“空缺”。通过文献查阅，我们发现肥大细胞（MC）预激既是导致AR复发的直接性因素，又与SP存在着密切的联动关系，是补足该“空缺”的重要“拼图”。因此，本次研究，我们提出“SP表达与MC预激联动”假说，并通过“SP表达与MC预激相关性实时动态检测”、“穴位埋线对模型大鼠MC预激的抑制水平分析”以及“穴位埋线/假埋线对模型大鼠复发指标的对比”，逐步阐明穴位埋线降低AR复发率的作用。

本研究围绕穴位埋线减少变应性鼻炎（AR）复发的机制，以“肥大细胞（Mast Cell, MC）与感觉神经肽P物质（Substance P,SP）交互联动”为假说，通过体内、体外试验分3个阶段展开研究。第一阶段，体外实验，探究SP对MC是否具有正向刺激作用。选取肥大细胞P815（MCp815）体外培养后SP升阶梯浓度干预，分别以CCK-8法检测MC增殖，RTCA记录细胞实时动态变化。结果：CCK8法提示SP浓度与MCp815增殖呈正相关，相关系数0.549；RTCA检测提示SP干预后CI值波动，波峰提前。二者均表明SP对MCp815增殖、分化具正向刺激作用。第二阶段，基因芯片试验。首先筛选SP最大浓度阈值效应下的MCp815差异基因，然后经IPA（Ingenuity Pathway Analysis）在线整合分析确定与细胞增殖凋亡密切关联的目标信号通路，最后对锁定通路行western blot验证。结果： PI3K/AKT与ERK/MAPK通路可能是SP激活MC而产生后续生物学效应的重要路径。第三阶段，体内实验，探究穴位埋线是否能有效抑制AR复发。建立MPI/AR大鼠模型，以穴位埋线为干预措施，假埋线/单纯致敏维持为对照，研究AR大鼠浓度耐受及时间耐受性。结果：穴位埋线可降低SP免疫组化染色IOD值、减少MC均野计数、下调MC-β类胰蛋白酶表达水平，组间差异具有统计学意义（P＜0.05），提示穴位埋线可提高AR大鼠浓度耐受力，延长其时间耐受性。综上， SP对MC具有正向刺激作用，穴位埋线通过抑制SP而下调影响MC增殖、分化及活化，从而提高MC稳态，减少AR复发。