西沙群岛野生诺尼种子内生菌的群落结构与多样性研究

Seeds are the reproductive organs of plants, which are in the first phase of plant ontogeny. In the recent half a century, a series of studies have shown that the endophytes were related with genotype, a period of growth and development and efficacy component production of plants. Noni (Morinda citrifolia L.) is a rare tropical plant, containing more than 160 kinds of nutrients, and it has a very unique health benefits. This study is intending to apply culture-independent methods, such as 16S rDNA clone libraries building, ARDRA typing and PCR-DGGE and so on, combined with traditional culture-dependent methods to research the endophytic microbial community structure diversity and its dominant microbes of wild Noni seeds from Paracel Islands in South China Sea. This study could provide a scientific basis for the reasonable implementation on microbiological control and strengthen in the natural fermentation of Noni products, which is necessary to ensure the quality of products. And a number of endophytic bacterial and fungal resources isolated from wile Noni seeds in this study, which would supply the basis for the further study in the beneficial microbes to improve the growth and efficacy component production of the Noni plant.

种子是植物的繁殖器官，是植物个体发育的第一个阶段。近半个世纪以来一系列研究表明植物内生菌与植物的基因型、生长发育时期及功效性成分生产具有一定相关性。诺尼系珍稀热带植物，富含营养素高达160余种，具有非常独特的保健功效和药用价值。本项目拟应用构建16S rDNA文库、ARDRA分型以及PCR-DGGE等非培养方法，并结合传统的微生物分离培养方法，研究我国西沙群岛野生诺尼（Noni）种子内生菌群落结构多样性及其优势菌群，为诺尼保健品自然发酵生产过程中合理实施必要的微生物控制与强化，保障诺尼保健品品质和性状的稳定提供重要的科学依据。并培养分离获得一批野生诺尼种子内生细菌及内生真菌菌种资源，为进一步利用其中的有益菌种促进诺尼植物的生长及其功效性成分的产生奠定微生物学基础。

本项目应用非培养方法并结合传统的微生物分离培养方法，研究我国西沙群岛野生诺尼种子内生菌群落结构多样性及其优势菌群，并培养分离获得一批野生诺尼种子内生细菌及内生真菌菌种资源，为进一步利用其中的有益菌种促进诺尼植物的生长及其功效性成分的产生奠定微生物学基础。.1）通过微生物培养方法对我国西沙野生诺尼种子内生细菌及真菌进行分离及筛选。共得到20株内生细菌，经鉴定将其归为变形菌门中的肠杆菌、伯克霍尔德氏菌和泛菌三个菌属。共分离到内生真菌48株，其中酵母菌39株，分属4个属内的5个种；霉菌9株，分属4个属内的4个种。.2）通过构建16S rDNA克隆文库的非培养方法对我国西沙野生诺尼种子内生细菌群落结构多样性进行研究，共涉及四大类群，33个属，42个OTU，优势菌属（丰度）依次为Enterobacter sp.（17.55%）、Bacillus sp.（16.79%）、Acinetobacter sp.（6.11%）、Pseudomonas sp.（6.11%）及Piscinibacter sp.（6.11%）。.3）以从诺尼中分离获得的潜在生防菌NG14为对象，利用微生物多相分类鉴定技术对其菌种的分类地位进行研究，将其鉴定为多粘类芽孢杆菌；并通过选择多种植物及人体病原菌作为生防对象进行拮抗试验，发现了该菌株具有广谱且良好的拮抗病原菌活性。.4）对分离自我国西沙群岛野生诺尼种子的内生细菌菌株CICC 10707、CICC 10599、CICC 10594、CICC32991、CICC32993及CICC 2502的进行菌种鉴定，确定其准确的分类地位依次为织片草螺菌、分散泛菌、阴沟肠杆菌、Eremothecium coryli、奥默柯达菌及胶孢镰刀菌。.5）本研究对分离自西沙群岛野生诺尼的NBD5T，NBD8两株内生细菌进行多相分类鉴定，最终确定这四株细菌为Sphingomonas属中的一个新种，命名为Sphingomonas morindae sp.nov.；对分离自西沙群岛野生诺尼的NR2T一株内生细菌进行多相分类鉴定，最终确定这四株细菌为Brachybacterium属中的一个新种，命名为Brachybacterium hainanense sp.nov.