TOLL样受体通路对糖尿病大血管致纤维病变的分子作用及桃核承气汤干预机制研究

前期病理研究发现糖尿病足患者大血管病变以内膜纤维性沉积、中膜层纤维性增生为主，糖尿病鼠大血管病变可能与纤维化相关。为探讨大血管纤维性病变与TOLL样受体通路的关系，我们提出："高糖与慢性炎症刺激引起内毒素增多导致线粒体DNA损伤，进而激活TOLL样受体通路，使TLR-2、TLR-4蛋白表达上调，致纤维化的细胞因子调节失衡，终致动脉纤维病变"科学假说。采用Ⅱ型糖尿病血管病变大鼠模型，在细胞、分子层面应用免疫组化、原位杂交等技术，以TOLL样受体通路对细胞外基质（ECM）的调控为切入点，从TLR2 、TLR4蛋白表达、促纤维化因子表达、线粒体形态功能水平等方面，多角度进行ECM降解失衡的机制研究，来阐明糖尿病动脉损伤纤维化病变突出的机理；进一步探讨活血化瘀中药桃核承气汤于造模早期及纤维化后干预，在阻断致纤维化细胞因子的生成与转录及其对成纤维细胞进行调控，进而抑制ECM过度沉积等方面作用靶点。

糖尿病合并血管病变是常见慢性并发症，而大血管病变是其危险事件高发的主要因素。因其严重影响患者生存质量成为防治领域研究的重点和难点。早期预防性干预，阻断大血管病变发展更是主要着眼点。既往认为糖尿病大血管病变主要指动脉粥样硬化，但近年国外研究显示从纤维沉积的启动到血管纤维化的分子通路研究可能成为糖尿病大血管病变研究的新突破口。而TLR-2及TLR-4为研究器官、组织纤维化的热门因子。 .本项目采用Ⅱ型糖尿病（T2DM）血管病变大鼠模型，从Toll样受体调控入手，阻断产生致纤维化的细胞因子的生成与转录及对成纤维细胞进行合理的调控，抑制细胞外基质过度沉积，探索大鼠血管病变纤维化形成机制。以线粒体损伤电子传递链活性氧（ROS）超量产生为切入点，来研究组织纤维化的细胞和分子生物学机制。通过线粒体损伤程度的测定，揭示线粒体电子传递链活性氧损伤与细胞外基质过度沉积的关系。观察活血化瘀中药在造模早期、呈纤维化损伤后干预对相关指标的影响，阐明糖尿病动脉损伤纤维化病变突出的机理.以免疫组化、原位杂交方法检测实验动物股动脉壁TLR-2、TLR-4及TGF-β、IGF-1含量，进而了解中药对阻断产生致纤维化的细胞因子的调控点。揭示活血化瘀中药早期干预在糖尿病动脉纤维化中的作用机制。.研究结果显示TLR-2、TLR-4、TGF-β、Smac、ROS在糖尿病大鼠的大血管中显著增加，IGF的表达下降，提示糖尿病大血管病变可能与Toll样受体通路及细胞凋亡有关，中药组方桃核承气汤对糖尿病大血管病变有明显改善作用，中药早期干预可有效预防大血管病变的发生与发展，其抗纤维化的机制可能是调节TLR-2、TLR-4通路开放、降低TLR-2、TLR-4蛋白表达，调控Smac表达、抑制血管上皮细胞过度凋亡，调节IGF表达，进而阻断血管纤维化进程。桃核承气汤对血管纤维化病变的抑制作用与用药剂量和用药时间成正相关。