Bcl-x剪接调控在耐药慢性粒细胞白血病中的治疗作用及机制研究

Chemotherapy-resistance is a pressing issue in chronic myeloid leukemia (CML) treatment. Exploring new therapeutic targets or chemotherapy sensitization targets is important. Previous studies and our results revealed that aberrant Bcl-x alternative splicing occours in CML and is related to chemotherapy-resistance and development of CML. Based on these, we propose a hypothesis: the targeted rectification of Bcl-x aberrant splicing will be conducive to CML treatment and chemotherapy sensitization. In order to prove this hypothesis, the Vivo-Morpholinos technology will be used to regulate Bcl-x splicing; the CML cell line, primitive bone marrow cells of CML patients, nude mouse transplantation tumor model and blood tumor model will be studied by real time PCR, western blot, flow cytometry, and drug sensitivity test. Additionally, we will make a further exploration on the effective combinations of Bcl-x splicing regulation and chemotherapy drugs in CML treatment. In short, the main objective of this project is to carry out an exceptionally useful exploration work for discovering new therapy target and chemotherapy sensitization target of CML.

化疗耐药是慢性粒细胞白血病（CML）临床治疗中亟待解决的问题，探索新的治疗靶点或化疗增敏靶点有重要意义。现有研究及我们的前期结果提示，Bcl-x基因在CML中发生异常选择性剪接，该异常剪接是CML进展和化疗耐受的关键分子基础。基于此我们提出假说：以特殊技术直接调控Bcl-x异常剪接有助于CML的治疗和化疗增敏。本项目中我们将应用具有明显优越性的Vivo-Morpholinos技术调控Bcl-x剪接，通过CML细胞株、CML患者骨髓原始细胞、裸鼠移植瘤模型及血液肿瘤模型，采用real time PCR、western blot、流式细胞术、药物敏感性实验等手段，从分子、细胞、组织及动物整体水平等多方面探讨Bcl-x剪接调控在CML治疗及化疗增敏中的作用及机制。并进一步探索Bcl-x剪接调控策略与常规化疗药物的有效组合，为临床耐药CML的治疗和化疗增敏提供理论和实验依据。

化疗耐药是慢性粒细胞白血病（CML）临床治疗中亟待解决的问题，探索新的治疗靶点或化疗增敏靶点有重要意义。现有研究及我们的前期结果提示，Bcl-x基因在CML中发生异常选择性剪接，大量转录生成Bcl-xL，Bcl-xS相应减低，致Bcl-xL/Bcl-xS比值显著增高，该异常剪接是CML进展和化疗耐受的关键分子基础。本项目中我们应用Vivo-Morpholinos寡核苷酸（vMO）技术靶向纠正Bcl-x剪接，通过细胞和动物实验，多方面探讨Bcl-x剪接调控在CML治疗及化疗增敏中的作用及机制。.本研究中，我们设计并合成了靶向Bcl-x剪接调控位点的特异性vMO，该vMO能稳定高效转染CML细胞，胞内稳定时长可达72h，能有效下调Bcl-xL/Bcl-xS mRNA和蛋白比值，并有一定的抗增殖和促凋亡功能。vMO联合靶向药物imatinib（IM）对Bcl-x的剪接调控作用明显优于单一因素的效能，对于耐药CML细胞株，vMO能将IM的IC50值由1.949μM降至0.552μM，效果显著。体内试验进一步证实， 通过瘤内注射或静脉注射vMO后，单纯vMO治疗均能显著降低裸鼠移植瘤体积，IM和vMO联合治疗时，裸鼠移植瘤体积降低更为显著，充分证实vMO能有效提高IM对 CML细胞成瘤能力的抗性。qRT-PCR及western blot证实，两种给药方式，均能使移植瘤内Bcl-xL/Bcl-xS mRNA和蛋白的比例明显降低，说明vMO在体内亦能靶向Bcl-x基因，发挥剪接调控作用，提升CML细胞对IM的敏感性。.总之，本项目的成果实施证明通过新型vMO技术靶向纠正CML细胞中Bcl-x基因的异常剪接能在体内外有效逆转CML细胞的增殖、抗凋亡、成瘤和耐药等恶性表型，为临床耐药CML的治疗和化疗增敏提供了新的理论和实验依据。.