利用嵌合泛素连接酶降解CML瘤细胞中致癌蛋白的新策略

针对CML患者瘤细胞中BCR/ABL的特异性抑制剂Imatinib 目前已作为CML的一线治疗方案而被广泛应用，但存在的突出问题是耐药性；其产生机制主要包括BCR/ABL过度扩增、激酶区突变以及Src家族激酶过度活化等；因此，发展新的治疗策略具有重要意义。文献和我们以往的研究表明，靶向性泛素化通过利用细胞内内在的泛素化蛋白降解机制，可实现靶向性降解疾病相关蛋白，堪称"蛋白敲除"策略；其具有避免诱发耐药突变、能灵活针对一个或一类靶蛋白、可与酶抑制剂联合应用等优点，在疾病治疗领域极具前景。本项目拟将这一新策略应用于对Imatinib耐药的CML治疗，巧妙构建不仅能针对BCR/ABL及其耐药突变体、同时能够针对Src家族激酶的嵌合泛素连接酶，采用慢病毒表达系统导入体外培养的瘤细胞及荷瘤鼠体内，实现联合降解致癌蛋白，抑制瘤细胞生长、克服耐药，为Imatinib耐药的CML治疗提供一种全新的方法。

针对慢性粒细胞性白血病（CML）患者瘤细胞中BCR/ABL的特异性抑制剂Imatinib 目前已作为CML的一线治疗方案而被广泛应用，但存在的突出问题是耐药性；其产生机制主要包括BCR/ABL过度扩增、激酶区突变以及Src家族激酶过度活化等。探索新的治疗策略具有重要意义。文献和我们以往的研究表明，靶向性泛素化通过利用细胞内内在的泛素化蛋白降解机制，可实现靶向性降解疾病相关蛋白，具有避免诱发耐药突变、能同时针对一类靶蛋白、可与酶抑制剂联用等优点。本项目中我们将这一策略用于对Imatinib耐药的CML治疗。项目的完成情况如下：首先采用重组PCR获得了能够针对BCR/ABL及其耐药突变体的嵌合泛素连接酶SH2-U-box并构建入真核表达载体；通过共转染、免疫共沉淀、泛素化实验等证实其能够结合BCR/ABL以及BCR/ABL T315I、并促进BCR/ABL发生泛素化和下调；将SH2-U-box导入体外培养的K562细胞中，BCR/ABL发生显著下调、细胞生长受到抑制；另外，SH2-U-box的表达可以增加K562细胞对imatinib的敏感性。最后获得了表达SH2-U-box的慢病毒;将病毒注射至以K562细胞进行皮下接种的荷瘤鼠瘤体局部，能够明显抑制瘤细胞生长。该研究可能为CML以及Imatinib耐药患者提供一种全新的治疗方法。项目所取得的成果包括：培养博士研究生1名，硕士研究生2名；发表中文研究论文3篇；申请发明专利1项；正在整理投递国际期刊论文1篇。