基于PI3K／Akt信号通路的补阳还五汤抗肺纤维化的作用及机制研究

Pulmonary fibrosis is a complex disease in respiratory department ,called “pulmonary arthralgia”by its symptom and pathology characteristic.Chinese herb prescription Buyanghuanwutang changed by invigorating qi，promoting blood circulation and removing blood stasis from the meridians was used on pulmonary fibrosis and showed curative effect. Zoopery discovered it can regulate the expression of cytokine TGF-β1、CTGF、MMP-9、TIMP-1、ILK、TNF-α in modle lung and serum. It has been confirmed that PI3K／Akt signal pathway participate pulmonary fibrosis by multi-cytokine.The study suggest PI3K／Akt signal pathway interrelated to pulmonary fibrosis with “Qi fatigue and blood stasis”in vitro and vivo.We observe the function of P13K/Akt signal pathway mediating pulmonary fibrosis,which intervened by Chinese herb prescription “Buyanghuanwutang”,explain correlation between P13K/Akt signal pathway and pulmonary fibrosis with “Qi fatigue and blood stasis”.It might provide a new approach to traditional Chinese medicine therapy for pulmonary fibrosis.

肺纤维化为呼吸内科难治性疾病之一。根据其临床表现和病理特征当属中医“肺痹”范畴。基于此，课题组运用益气化瘀通络传统方剂补阳还五汤化裁治疗肺纤维化，取得了较为满意的疗效。并结合动物实验发现中医益气化瘀通络可有效抑制模型动物肺组织及血清中的TGF-β1、CTGF、MMP-9、TIMP-1、ILK、TNF-α等细胞因子的水平。已有研究证实，PI3K／Akt信号通路参与多种细胞因子的致纤维化过程，结合工作基础，本研究提出PI3K／Akt信号通路与肺纤维化“气虚血瘀”密切相关的科学假说，拟借助动物实验及体外细胞实验，研究中医治疗气虚血瘀经典方剂补阳还五汤干预肺纤维化的作用及机制，探讨PI3K／Akt信号通路与肺纤维化“气虚血瘀”的相关性，为中医药治疗肺纤维化提供新的思路与方法。

肺纤维化是一种慢性的、不可逆的、弥漫性间质性肺疾病的最终病理结局，其发病率及病死率，呈逐年上升趋势，而具体的发病机制尚未完全被人了解，迄今仍缺乏有效的治疗措施。因此，寻找有效的治疗药物及方法是研究肺纤维化之重。根据肺纤维化临床表现及病理特征认为本病应属于中医“肺痹”范畴，其病因病机是：内有肺肾气虚，外有邪气侵袭，致气虚血瘀，脏腑经络气机痹阻不通，终致肺痹。因此，治疗肺痹应遵循“凡治痹，必通络以使气机畅达”的治疗原则，益气为主，活血化瘀通络贯彻始终，治以补阳还五汤。. 本课题组通过动物实验及体外细胞实验，研究补阳还五汤干预肺纤维化的作用及机制。通过动物实验发现，补阳还五汤能明显抑制博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的血清HYP和胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ的含量以及肺系数(p<0.05或p<0.01)，具有统计学意义；补阳还五汤能够明显减轻大鼠肺泡炎及肺纤维化程度(p<0.05或p<0.01)，具有统计学意义，说明了补阳还五汤可以防治大鼠肺纤维化。通过动物实验进一步发现补阳还五汤可抑制肺纤维化大鼠肺组织中CTGF和p-AKt蛋白的表达，以及CTGF和AKt mRNA的表达(p<0.05或p<0.01)，具有统计学意义。由于AKt为PI3K的直接靶蛋白，因此，补阳还五汤可能是通过作用于PI3K/AKt通路抑制肺纤维化的进展。.通过体外实验发现，补阳还五汤可降低TGF-β1刺激的人肺泡上皮A549细胞肺纤维化模型中胶原蛋白Ⅰ和Vimentin蛋白表达及mRNA的含量，并且可促进E-cadherin蛋白表达及mRNA含量的恢复(p<0.05或p<0.01)，具有统计学意义，说明了补阳还五汤抑制了肺纤维化细胞由上皮细胞向间质细胞转化的进程；同时补阳还五汤可抑制纤维化细胞p-PI3K和p-AKt的蛋白表达(p<0.05或p<0.01)，具有统计学意义。. 因此，结合体内实验和体外实验，认为益气活血化瘀的经典方剂补阳还五汤可能通过抑制PI3K/AKt信号通路发挥抗肺纤维化的作用，PI3K／Akt信号通路与肺纤维化“气虚血瘀”之间存在一定的相关性，本研究对中医药防治肺纤维化提供新的思路和方法。