NF-κB调控c-MYC通路活性抑制食管鳞癌细胞生长的机制研究

NF-κB plays a critical role in the process of tumor initiation and progression. However it can function as either tumor promoter or suppressor, which might be correlated to its complicated role in cell growth regulation. So far, few target genes have been reported involving in cell proliferation regulation by NF-κB, especially those involving in proliferation inhibition. Our previous results indicated that NF-κB could inhibit the proliferation of EC109 cells, probably through downregulation of c-MYC expression by miR-34a. MYCBP promoted c-MYC transcriptional activity through binding to its N-terminal domain. Bioinformatic analysis indicated that MYCBP might be a downstream target of miR-26b; our results also showed that p65 overexpresssion in EC109 cells could increase the expression levels of miR-26b. Hence, we suppose that NF-κB might suppress c-MYC activity through regulating miR-26b/MYCBP pathway, which contributed to its role in cell growth suppression. This project is aimed to investigate the regulation between NF-κB, miR-26b and MYCBP and their functions in cell growth control. Our research will be helpful to understand the mechanism of NF-κB in cell growth regulation and provide new evidence in the diagnosis and therapy for cancer.

NFκB是影响肿瘤发生发展的重要信号通路，但有促进和抑制两种作用，与其对细胞生长的双面性作用有关。NFκB对细胞生长的调控取决于激活的下游靶基因，然而迄今为止发现的参与其调控增殖的靶基因不多，尤其参与抑制增殖的。前期研究提示NFκB可抑制食管鳞癌细胞EC109的增殖。MYCBP为c-MYC结合蛋白参与调控其转录活性。生物信息学预测MYCBP3'UTR区含有miR-26b的结合位点，我们又发现过表达p65可上调EC109细胞中miR-26b的表达。因此推测NFκB可通过miR-26b/MYCBP途径调控c-MYC的转录活性从而发挥生长抑制作用。本研究拟采用CHIP、EMSA、报告基因试验及细胞学实验研究NFκB、miR-26b及MYCBP之间的调控关系及其在细胞生长调控中的作用。研究将阐释NFκB调控细胞生长的新机制，有助于深入理解NFκB在肿瘤中的复杂作用，并为肿瘤临床诊治提供新的依据。

NF-κB是影响肿瘤发生发展的重要信号通路,参与肿瘤与微环境的相互作用。已有的研究显示NF-κB对肿瘤微环境中间质细胞的调控多发挥促进肿瘤发生发展的作用，而对肿瘤实质细胞生长则呈现促进和抑制的双向作用。然而迄今为止NF-κB抑制细胞生长的机制仍不是很清楚。我们的前期研究结果提示NF-κB对食管鳞癌细胞有生长抑制的作用，因此本项目进一步对其机制进行深入研究。主要研究内容及结果如下：1）进一步明确NF-κB对食管鳞癌细胞生长的作用。NF-κB在肿瘤中作用复杂，对食管鳞癌细胞确有生长阻滞作用，与细胞G1/S周期转换调控无关，可能与阻滞G2/M期转换、促进细胞凋亡有关。另外，p53和c-MYC可能参与NF-κB的生长阻滞作用。2）筛选了两个可能受NF-κB调控的miRNA，miR-26b和miR-330。NF-κB可以与miR-26b和miR-330基因的表达调控区结合，miR-26b和miR-330分别受到NF-κB的正调控和负调控。3）明确了miR-26家族成员，包括miR-26a和miR-26b，在食管鳞癌细胞生长调控中的作用及可能的机制。MiR-26家族在绝大部分的食管鳞癌组织中低表达，且无论在分期早或是分期晚的病人中均有超过50%的癌组织表达降低超过一半，说明miR-26的表达降低在食管鳞癌发生过程中是一个早期事件。MiR-26可能是通过调控MYCBP的表达进而抑制c-MYC下游通路的活性。食管鳞癌中miR-26家族基因的低表达与DNA甲基化无关。4）明确了miR-330在食管鳞癌细胞生长调控中的作用及可能的机制。MiR-330在食管鳞癌组织中呈高表达。体内体外实验均提示miR-330可促进食管鳞癌的形成，可能与其促进细胞增殖、抑制凋亡和促进细胞的迁移侵袭有关。MiR-330的促癌作用可能是通过抑制PDCD4的表达实现的。本项目研究结果有助于理解NF-κB在肿瘤中的复杂作用，为肿瘤的精准治疗提供依据。同时本项目发现在食管鳞癌中发挥癌基因或抑癌基因样的miRNA两个，尤其miR-26家族，很可能成为食管鳞癌早期诊断的分子分型标记物。