Numb核内转移对notch、p53的影响在子宫内膜癌发病机制中作用的研究

子宫内膜癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，其发病机理一直是妇科界研究热点。近些年发现细胞极性与上皮恶性肿瘤发生密切相关，Numb在细胞极性建立中起关键调控作用。关于Numb是否参与子宫内膜癌的发病机制尚未见报道。课题前期研究发现Numb表达上调，证实与内膜癌有相关性；同时发现Numb发生"核内转移"，蛋白空间位置变化将引发功能改变，提示Numb核内转移在子宫内膜癌发生中具有重要作用，其内在机制可能与notch、p53相关。本项目拟在前期基础上，借助蛋白免疫印迹、RNA干扰等技术研究Numb在核内、外定位和定量表达规律；探讨Numb、notch、p53三者相互协同拮抗作用；并通过抑制Numb核内转移比较肿瘤细胞增殖凋亡能力、裸鼠体内成瘤能力，探索Numb核内转移对notch、p53的影响与子宫内膜癌发生的相关性及其内在机制，有望揭示子宫内膜癌新的发病机理，为寻找临床治疗的新靶点奠定实验基础。

子宫内膜癌是女性三大恶性生殖系统肿瘤之一，对其发病机理机制的研究一直是妇科肿瘤领域的研究热点。Ｎumb是近20年来逐渐被认识、重视的一个蛋白，广泛参与细胞分化与增殖、凋亡与再生、泛素化降解以及肿瘤发生等众多生理病理过程，与Notch、Hedgehog、p53等重要的信号途径存在密切联系。Numb与子宫内膜癌的发生是否存在相关性？本课题借助临床病例标本、子宫内膜癌细胞株，通过免疫组化、免疫细胞荧光、免疫印迹、免疫共沉淀、质粒构建及转染，siRNA技术以及流式细胞技术等生物学方法，对Numb在子宫内膜癌发生机制中的作用进行了探索。我们发现：○1Numb在子宫内膜癌组织的表达水平比正常子宫内膜组织高。○2Numb在HEC-1B、HEC-1A、 Ishikawa (ISCI)三种细胞系中具有表达，并且胞质和胞核均有分布。○3下调Numb水平可以加速细胞的增殖，而过表达Numb可以促进细胞的凋亡，并且诱导细胞凋亡的功能并非完全依赖于Numb的PTB结构域。○4在子宫内膜癌细胞中，Numb可以与p53、HDM2蛋白结合形成复合物，且并非局限于胞质定位，推测Numb的入核水平与子宫内膜癌的发生有密切联系。○5本课题组进一步探索了Numb入核的机制，发现外源性Numb的过表达不能直接将外源性的Numb带入核内，且Numb的PTB结构域是与p53结合的主要部位；下调HDM2和p53的水平没有增加Numb的入核水平，相反，高表达的HDM2可能阻止了Numb的入核。○6Numb在子宫内膜癌内发挥抑癌功能与保护p53的zuo'yong密切相关。综上所述，本课题证实Numb具有抑癌作用，但子宫内膜癌中Numb的高表达作为细胞的一种应激性上调反应，未能发挥正常功能，这可能与高表达的HDM2有关，后者可能起到了负向调节Numb入核的作用，使得Numb不能在核内发挥保护p53功能的作用，最终导致肿瘤的发生，但究竟谁正向调控Numb的入核还需要进一步研究。子宫内膜癌中Numb的作用还有更多值得研究的地方，上述提到的一些推测性问题将是本课题组后期的研究方向。本课题初步完成预期目标：○1目前已撰写两篇论文，一篇已投稿（SCI期刊），正在review中，一篇即将投稿（SCI期刊）；一篇中文综述已发表（统计源期刊）。○2参加国际会议1次（摘要收录）；参加国内会议1次（论文汇编）。○3培养硕士研究生1名。