围生期DBP暴露通过干扰ER/TGF-β/Smad通路导致子鼠卵泡发育异常的分子机制研究

Di-n-butyl phthalate (DBP) is the main environmental disruptors exposured to pregnant women in most regions of China, it can be passed across generations to offsprings and affect their health. Our previous studies have found that perinatal DBP exposure can induce the abnormal development of follicle in offsprings. TGF-beta is the cytokine regulating the follicular development. DBP can inhibit the TGF-β1/Smad pathway of germ cells in male. Whether DBP can regulate the function of granulosa and development of follicle through ER/TGF-β/Smad pathway? Our preliminary study has found that DBP can up-regulate the mRNA levels of CYP19 and TGF-β3 in KGN cells. Present study will focus on the ER/TGF-β/Smad pathway and explore the influence of perinatal DBP exposure on the function of granulosa and molecular mechanism of abnormal follicular development through animal study in vivo, granulosa primary culture in vitro, pre-antral follicle primary culture in vitro. The purposes of present study are to supply evidence of environmental protection for peri-pregnant women and perinatal infants, supply evidence of DBP limitation to environmental organization, supply new idea of therapy for women with anovulation infertility.

邻苯二甲酸二丁酯（DBP）是我国多数地区妊娠女性主要的环境内暴露物质，可被跨代传递给后代并影响其健康。前期研究发现：围生期DBP暴露可致子代卵泡发育异常。TGF-β是调控卵泡发育的细胞因子。DBP可抑制雄性生殖细胞的TGF-β1/Smad通路。DBP能否经ER/TGF-β/Smad调控颗粒细胞功能和卵泡发育，尚无研究报道。预实验发现：DBP上调人颗粒细胞系的P450芳香化酶和TGF-β3的基因表达水平。本项目以ER/TGF-β/Smad通路作为研究靶点，采用动物体内研究、颗粒细胞原代培养和窦前卵泡培养的方法，运用qRT-PCR等实验技术，研究围生期DBP暴露对子代卵巢颗粒细胞功能和ER/TGF-β/Smad通路的影响，探讨其导致子代卵泡发育异常的分子机制。为围孕期妇女及围生期儿的环境有害因素防护提供理论依据；为环保机构制定DBP限量规定提供支撑证据；为无排卵性不孕妇女的临床治疗提供新思路。

邻苯二甲酸二丁酯（DBP）是我国多数地区妊娠女性主要的环境内暴露物质，可被跨代传递给后代并影响其健康。TGF-β是调控卵泡发育的细胞因子。DBP可抑制雄性生殖细胞的TGF-β1/Smad通路。DBP能否经ER/TGF-β/Smad调控颗粒细胞功能和卵泡发育，尚无研究报道。.本项目以ER/TGF-β/Smad通路作为研究靶点，采用动物体内研究、颗粒细胞体外培养，运用qRT-PCR等实验技术，研究围生期DBP暴露对子代卵巢颗粒细胞功能和ER/TGF-β/Smad通路的影响。体内动物研究结果表明：围生期DBP暴露，可致雌性成年子鼠卵巢组织TGFβ2和TGFβ3的基因和蛋白水平降低，TGFβRⅡ基因和蛋白有降低趋势，LHR、FSHR、CYP19a的mRNA表达水平降低；雌性成年子代易发生腹型肥胖。体外细胞实验结果表明：DBP可能呈时间依赖性地通过雌激素受体抑制KGN细胞的TGF-β2、TGF-β3基因表达；通过TGF-β通路抑制TGF-βRⅡ基因表达，以24小时作用明显。通过非ER途径和非TGF-β通路抑制FSHR和CYP19基因表达，24小时抑制表达而48小时促进表达。DBP呈时间依赖性地调控P450芳香化酶蛋白水平，24h增加而48h降低。激活TGF-β通路可抑制KGN细胞增殖，而DBP可能通过TGF-β通路抑制KGN细胞增殖。DBP可致KGN细胞分泌的孕酮和雌二醇下降，上述作用既不通过TGF-β通路，也不依赖于雌激素受体。. 因此，围生期DBP暴露可能通过雌激素受体介导，降低卵巢颗粒细胞的TGF-β2、TGF-β3、TGF-βRⅡ，干扰TGF-β通路而抑制颗粒细胞增殖；可降低颗粒细胞分泌雌二醇和孕酮，但该效应不通过TGF-β通路和雌激素受体介导。