乙型肝炎病毒相关性肾炎肾小管上皮-间质转化机制研究

乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBVGN）是我国较常见的继发性肾病，发病机制尚不明了。我们已证实乙型肝炎病毒HBx、MHBst通过激活NF-κB诱导肾小管上皮细胞凋亡，为HBVGN的病毒直接致病学说提供了依据。前期研究结果发现HBx与TGF-b1表达、Notch信号激活及上皮-间质转化（EMT）之间可能有一定关系，提示HBx可能通过Notch信号通路引发EMT。鉴于以EMT为组织学特征的肾小管-间质纤维化是HBVGN发展至终末期肾衰竭的重要环节，本课题拟利用RBP-J敲除小鼠及RNAi、荧光素酶检测等技术，证实HBx/MHBst上调肾小管上皮细胞Jagged1表达及EMT发生，明确HBx/MHBst上调TGF-b1、Jagged1表达的具体机制，通过HBx/MHBst-TGF-b1-Jagged1/Notch-EMT通路，阐明HBV直接引发HBVGN的生物学机制，为防治HBVGN提供新实验依据。

本课题主要围绕HBx/MHBst—TGF-beta1—Jagged1/Notch信号途径对乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBVGN）的肾小管上皮-间质转化（EMT）发生机制进行研究。通过对HBVGN肾组织原位研究，我们发现与正常肾组织相比，TGF-beta1、Jagged1、alpha-SMA、Fibronectin及IV型胶原表达显著升高、E-cadherin表达下降（P<0.05）；Jagged1与HBx/MHBst mRNA、EMT标记物（alpha-SMA、Fibronectin及IV型胶原）与HBVGN患者的血肌酐值具有显著相关性（P<0.05）。HBx/MHBst167转染的肾小管上皮细胞Jagged1表达显著升高、TGF-beta1表达略有升高、EMT形成，Jagged1 RNAi处理可抑制细胞EMT发生；双荧光素酶报告基因检测提示HBx/MHBst167对TGF-beta1启动子区（-308～+812 bp）仅具有微弱的激活作用；免疫共沉淀未发现HBx/MHBst167与Smad4蛋白的结合关系。上述实验结果提示HBx/MHBst167可能直接上调Jagged1的表达、而非通过TGF-beta1/Smad4信号途径，诱导肾小管上皮细胞EMT发生。该研究将丰富HBV直接致病学说，为防治HBVGN提供新的理论依据。