高危型HPVE7表观沉默的miR-127在宫颈癌转移中的作用及机制研究

目前研究表明微小RNAs在宫颈癌中起重要作用，但表达和作用机理尚不清楚。我们发现miR-127在干扰HeLa细胞E7后表达显著上调，可抑制宫颈癌细胞迁移，提示miR-127可能作为抑癌miRNA发挥功能;预测的miR-127靶基因ID1与癌细胞的侵袭转移密切相关;miR-127表达抑制可能与E7介导的启动子甲基化相关。本项目将在此基础上进一步探讨miR-127对宫颈癌转移抑制作用及分子机制，E7导致miR-127启动子甲基化的分子机理。拟通过病例研究、体外细胞实验和动物实验来明确miR-127表达与宫颈癌临床病理指标、HPV感染和启动子甲基化的关系，验证miR-127是否通过ID1及其下游分子调控宫颈癌侵袭转移，阐明E7是否与c-myc和DNMT1形成三聚体并结合miR-127启动子来抑制其表达。本项目将为深入揭示HPV相关宫颈癌的发生机制提供新的线索，为发现新的宫颈癌治疗靶标奠定基础。

宫颈癌在我国发病率高，对妇女身心健康影响严重，其发病机理尚不完全清楚。高危型HPV感染是导致宫颈癌的重要病因。HPV病毒癌基因E7促进宫颈癌发生发展的详细机制尚未完全阐明。微小RNAs做为基因表达的重要调控子，在肿瘤的发生中可以发挥癌基因或抑癌基因的作用，而微小RNAs表达调控的机制尚不清楚。我们的前期研究发现HeLa细胞干扰E7表达后，microRNAs表达谱发生改变，其中miR-127表达上调显著，且上调miR-127表达能抑制宫颈癌细胞迁移与侵袭。在此基础上，本项目在组织水平检测miR-127表达与HPV感染和宫颈癌临床病理参数的关系，发现miR-127表达与HPV感染呈负相关；miR-127表达与宫颈癌的临床分期、转移等相关，并且其可以作为宫颈癌预后的独立指标。本项目从分子和组织水平检测和验证miR-127在宫颈癌中的靶标，通过luciferase、WESTERN BLOT、qRT-PCR和transwell assay确定ID1和SETD8是miR-127抑制宫颈癌细胞迁移的直接靶基因。本项目通过裸鼠移植瘤模型，发现过表达miR-127的肿瘤细胞在体内生长与转移受到抑制。本项目通过检测宫颈癌组织及癌旁组织中miR-127启动子的甲基化，证实miR-127在宫颈癌中下调与其启动子的甲基化显著相关。本项目进一步在细胞水平干扰c-myc和DNMT1的表达，发现该两蛋白能抑制miR-127在宫颈癌细胞的表达，干扰E7、c-myc或DNMT1表达可以降低宫颈癌细胞中miR-127启动子的甲基化水平。通过本项目的研究我们明确了miR-127抑制宫颈癌侵袭转移的分子机制，初步发现了E7、c-myc和DNMT1通过促进miR-127启动子甲基化来抑制其表达的分子机理，这为研究HPV相关宫颈癌的形成机制提供了有意义的新思路，也为认识受E7调控的复杂信号通路提供了重要线索，并为治疗宫颈癌、预防其专业和复发提供了新的靶点。