C1q-gC1qR复合体在高危型HPV E2致宫颈癌细胞凋亡中的作用及机制研究

We previously discovered that: ①The infection of high-risk human papillomavirus (HPV) was an important risk factor of cervical cancer ② in women with cervical cancer, the high-risk human papillomavirus (HPV) E2 significantly decreased, the expression of cervical tissue gC1qR protein downregulated, C1q-gC1qR complex anchoring on the surface of mitochondria membrane ③High-risk HPV E2 vector transfected with cervical cancer cells, induced its apoptosis, upregulated the expression of gC1qR, downregulated the copy of mitochondria and increased ROS ④Alpha lipoic acid could release the stress of mitochondria, decrease the apoptosis of cervical cancer cells transfected with high-risk HPV E2 vector and therefore we suppose that the mechanism of high-risk HPV E2 inducing apotosis of cervical cancer cells has certain correlation with C1q-gC1qR complex. Our study is designed to use the overexpression and RNAi technique to study the influence of C1q-gC1qR complex to the function of mitochondria, and with the help of FCCP and alpha lipoic acid, to evaluate the role of mitochondria in high-risk HPV E2 induced apoptosis of cervical cancer cells. This study is original, and will eluminate the mechanism of high-risk HPV E2 induced apoptosis of cervical cancer cells and will provide some theoretical information for preventing the happen of cervical cancer.

我们前期发现：①高危型HPV感染是宫颈癌变发生的危险因素；②高危型HPV E2在宫颈癌变者体内显著下调同时，其gC1qR表达减少、且以C1q-gC1qR复合体锚定线粒体膜表面；③高危型HPV E2质粒转染宫颈癌细胞可诱导其细胞凋亡、gC1qR表达上调，同时线粒体拷贝数减少、ROS升高；④α硫辛酸改善线粒体应激可减少高危型HPV E2质粒干预下宫颈癌细胞的凋亡，提出高危型HPV E2致宫颈癌细胞凋亡的机制与C1q-gC1qR复合体致线粒体功能障碍有关学术思想。研究拟以过表达、RNAi技术，探讨C1q-gC1qR复合体对线粒体功能的影响，获得其致线粒体损伤的证据；应用FCCP、α硫辛酸等工具药物，评估线粒体功能变化在宫颈癌细胞凋亡中的作用，论证高危型HPV E2致宫颈癌细胞凋亡的线粒体机制。本研究有源头创新性，将阐明高危型HPV E2致宫颈癌细胞凋亡的机制，为防治宫颈癌的发生提供新理论。

宫颈癌是世界范围内危害女性生殖健康的常见恶性肿瘤，占世界女性恶性肿瘤的第二位、发展中国家恶性肿瘤的第一位。在过去的二十年里，全球每年约有50万的新发宫颈癌病例，且有25万人死于宫颈癌。我国是世界上宫颈癌高发区之一，每年新增宫颈癌患者在13.15万人左右, 占女性生殖系统恶性肿瘤的73%-93%，且发病年龄亦渐趋年轻化。宫颈癌的病因学研究已经证实，人类乳头瘤病毒（Human papilloma virus, HPV）感染是导致宫颈癌及其相关病变的首要因素，因此深入研究HPV感染对宫颈癌发生的影响及其作用机制开始成为预防医学领域疾病早期防治的一个热点研究内容。.高危型HPV16、18型感染是宫颈癌恶变的重要危险因素。其中，线粒体功能障碍机制是近年来提出的有关高危型HPV 16、18 E2抑癌的新理论。进一步预实验结果提示：高危型HPV E2基因表达载体转染宫颈癌细胞后，细胞中gC1qR蛋白表达量明显上调，宫颈癌细胞凋亡显著增加；免疫荧光激光共聚焦检测发现线粒体膜表面有大量C1q-gC1qR复合体锚定；电子显微镜下观察发现细胞中线粒体数量减少，嵴断裂、减少、消失，部分线粒体肿胀，甚至呈空泡状；荧光定量PCR检测发现细胞中线粒体拷贝数显著减少，提示高危型HPV E2致宫颈癌细胞凋亡的机制与C1q-gC1qR复合体致线粒体功能障碍有关学术思想。因此，进一步分析该基因在宫颈癌细胞中的生物学特征与功能、探讨其影响线粒体功能的可能机制十分必要。.本研究旨在深入探讨gC1qR基因的生物学特征（如高危型HPV E2基因干预下该基因的表达变化趋势、gC1qR蛋白的亚细胞定位等）；通过构建该基因表达载体或RNAi沉默表达载体，转入宫颈癌细胞，观察该基因过表达或表达沉默对宫颈癌细胞线粒体功能的影响，并进一步以线粒体拷贝数、线粒体形态、线粒体内ROS浓度、线粒体膜电位及细胞内ATP总量等为观察指标，从gC1qR致线粒体功能改变的角度分析高危型HPV E2基因致宫颈癌细胞凋亡的机制。