滋养细胞来源的趋化因子CCL24 对蜕膜γδT细胞数量和功能的调节

In first-trimester pregnant women, the number of γδ T cells at decidua is significantly increased; in contrast to a V δ2 chain preference of decidual γδ T cells in recurrent spontaneous abortion (RSA) patients, the cells dominantly use V δ1 chain in normal pregnancy. Our recent work found that trophoblasts are an important source of CCL24 at the maternal-fetal interface. Meanwhile, decidual γδ T cells express the highest level of CCR3 compared to other immune cells. We now inferred that trophoblast-derived chemokine CCL24 could regulate the number and functions of decidual γδ T cells, and therefore contributing to an immune tolerance environment at the maternal-fetal interface. In the present study, we will first analyze whether trophoblast-derived chemokine CCL24 regulates the processes of selective chemotaxis, adhesion, cell proliferation and apoptosis of γδ T cells. Next, we will analyze the impact of CCL24 on the secreting function of decidual γδ T cells by using cytometric bead array. Following that, we will treat cells with inhibitors of intracellular CCL24 pathways, such as MAPK/ERK pathway and PI3K/Akt pathway, and then investigate the down-stream pathways of CCL24. Finally, we will evaluate whether the improper regulation of CCL24/CCR3 to γδ T cells is related to RSA. Our study would be helpful for understanding the mechanism of normal pregnancy and might offer clinical trails for treating RSA.

人早孕期蜕膜γδT细胞的数量明显增加，以Vδ1型为主，而复发性流产患者中Vδ2型γδT细胞比例升高。我们新近研究发现，滋养细胞可分泌大量的趋化因子CCL24，且90%的γδT细胞其受体CCR3为阳性。然而，滋养细胞来源的CCL24对蜕膜γδT细胞的数量和分泌功能是否有调节作用尚不明确。本课题将首先从细胞趋化、粘附、增殖和凋亡等方面分析CCL24对蜕膜γδT细胞的数量是否有选择性调节作用；其次，通过检测细胞因子分泌谱来判断CCL24对蜕膜γδT细胞功能的影响；随后；通过研究细胞内信号传导来解析CCL24发挥上述作用的信号通路；最后，我们将探讨CCL24/CCR3对γδT细胞调节的失衡是否与复发性流产相关。本课题的研究不但有助于我们加深对正常妊娠过程和复发性流产发病机制的了解，还有望对临床上防治复发性流产提一定的供理论依据。

对母体而言，胚胎是一种“异基因移植物”。母胎界面可形成免疫耐受微环境，不仅保护胚胎组织免受母体攻击，反而营养支持胚胎生长。“趋化因子”是一组能趋化免疫细胞并促进其活化的可溶性细胞因子。我们前期实验已发现滋养细胞能分泌大量的趋化因子CCL24。CCL24又被称为extaxin 2，可与唯一受体CCR3结合，从而高效趋化免疫细胞到局部，参与以Th2型反应为主的过敏反应及抗寄生虫感染。在本课题中，我们研究了滋养细胞来源的CCL24对滋养细胞和蜕膜γδ T细胞数量及功能的调节作用。结果表明：在人早孕期，滋养细胞自分泌的CCL24能通过ERK1/2 和PI3K信号，并激活下游的Ki67和MMP9来促进细胞自身的生长和侵袭过程，从而发挥促进“胚胎种植”过程的作用。在母-胎界面，滋养细胞分泌的趋化因子CCL24促进外周γδ T细胞趋化和粘附在组织局部、调节蜕膜γδ T细胞的增殖和凋亡能力可能是人早孕期子宫γδ T细胞数量增加的原因之一。人早孕期蜕膜γδ T细胞主要以活化状态而存在，且母-胎界面特殊环境对维持细胞活化十分重要。蜕膜γδ T细胞的活化也存在“双信号”，即CD3分子可直接为蜕膜γδ T细胞提供活化的“第一信号”和共刺激分子NKG2D、ICOS、GITR和CD40L提供的“第二信号”；然而，活化性共刺激分子NKG2D、ICOS、GITR和CD40L还可以单独活化体外培养的蜕膜γδ T细胞。蜕膜γδ T细胞在母-胎界面可通过分泌Th2型为主的细胞因子参与形成免疫耐受环境。活化刺激后的蜕膜γδ T细胞不仅分泌Th2型细胞因子的水平增加，Th1型细胞因子和胞内细胞毒性分子的产生水平也明显增加，说明活化刺激后的蜕膜γδ T细胞还有一定的抗感染免疫潜能。滋养细胞分泌的趋化因子CCL24细胞分泌细胞因子和杀伤性分子的调节作用并不强。然而，在滋养细胞上清可能还存在其他分子发挥着促进蜕膜γδ T细胞分泌IL-6和IL-10的作用。在母-胎界面，妊娠相关激素E、P和hCG不仅通过促进CCL24/CCR3信号来增强“胚胎种植”过程，而且可以通过此信号促进γδ T细胞在蜕膜中数量增加、细胞活化和分泌功能的改变，从而间接调节免疫耐受微环境的形成。