补肾化痰益智法对Alzheimer病Aβ级联损伤的作用及机制研究

阿尔茨海默病（AD）是严重影响老年人群健康的重大疑难疾病。中医认为，老人多痰多肾虚，"肾虚则志不足"，"呆病多痰"，"治呆不治痰非其治也"。临床实践表明补肾化痰益智是AD的有效治法。AD的病因和发病机理至今尚不明确，Aβ级联损伤是目前最广为接受的学说。本课题拟在前期研究基础上，以Aβ生成、沉积及其神经毒性为靶点，选用APPV717I转基因小鼠模型和体外细胞模型，运用RT-PCR、Western Blot等现代科学技术，从行为学、神经病理、β2-肾上腺素受体介导G蛋白偶联受体激酶、泛素-蛋白酶体途径、巨噬细胞和粘附分子表达等方面，探讨"补肾化痰益智法"对AD的作用及机制，并观察AD患者肾虚痰阻证型与Aβ级联损伤分子靶标的相关性及该治法的作用，为临床应用"补肾化痰益智法"防治AD提供科学依据，丰富和发展中医治则治法理论。

AD是严重影响老年人群健康的重大疑难疾病，补肾化痰益智法是AD治疗的重要治法之一。本项目通过临床研究和动物/细胞实验，从行为学、Aβ生成、降解、沉积、神经病理、氧化应激、巨噬细胞和粘附分子表达、泛素-蛋白酶体途径等方面，研究补肾化痰益智对AD的作用及机制。取得的重要研究结果包括：（1）以3月龄APP/PS1双转基因小鼠（脑内Aβ形成初期）为动物模型，通过Morris水迷宫等行为学测试，发现以补肾化痰益智法为指导的补肾化痰方和大补元煎能改善该小鼠认知功能，通过增加Aβ降解酶NEP、IDE表达，降低RAGE/LRP1转运体的表达，降低脑组织Aβ1-40和Aβ1-42的含量，减少Aβ沉积所致的神经元病理损害。（2）对补肾化痰方进行拆方研究，发现益智方、补肾方、化痰方对APP/PS1双转基因小鼠行为学均有改善作用，通过泛素、泛素连接酶UCH-L1、CHIP基因和蛋白的表达及病理学观察发现，原方较补肾方、化痰方、益智方，能更为显著改善该小鼠脑内泛素蛋白酶途径障碍。（3）补肾化痰方和大补元煎均能清除脂质过氧化的代谢产物MDA，增强SOD和GSH-Px的活性，提高了机体的抗氧化能力。补肾化痰方可降低NF-κB的表达及IL-1β、TNF-α含量，增加外周血黏附分子含量CD18、CD54的含量。以Aβ1-42作用于BV-2细胞和PC12细胞，构建AD细胞模型，发现补肾化痰方含药血清能降低NF-κB、COX-2的表达，调控IL-6、TNF-α、IL-1β mRNA的表达，提示补肾化痰益智法可降低AD炎症反应。（4）以补肾化痰益智法为指导的补元清脑颗粒，能激活APP/PS1双转基因小鼠PI3K/Akt信号通路，增加BCL-2表达，降低BAX的表达，提示补肾化痰益智法可通过抑制Aβ诱导的神经元凋亡，减少Aβ神经毒性作用。同时，临床研究表明补肾化痰益智法能改善MCI患者记忆水平和日常生活能力，且能有效降低血浆Aβ1-42浓度, 减少IL-1、IL-6、TNF-α炎性因子分泌。该研究从整体-细胞-分子水平，阐释了减少Aβ生成、沉积和神经毒性相关分子靶标是补肾化痰益智法治疗AD的重要作用机制。