同源框基因Nkx3.1对前列腺癌Her-2/neu表达调控的研究

前列腺癌一旦发展到激素抵抗阶段目前无有效处理方法。Nkx3.1是受雄激素调节、前列腺特异的同源框基因。我们前期及国内外研究发现其表达随前列腺癌进展而下降，且与肿瘤转移、激素抵抗强烈相关。与之相反，在晚期、转移、激素抵抗前列腺癌中Her-2/neu呈过表达。通过软件分析发现，Her-2/neu启动子区域存在4个潜在的Nkx3.1一致性结合位点。通过构建Nkx3.1真核表达质粒及siRNA载体，使LNCaP细胞Nkx3.1过表达或沉默、恢复DU145和PC3细胞Nkx3.1表达，分析其对Her-2/neu表达影响。染色体免疫共沉淀法进一步分析Nkx3.1对Her-2/neu启动子调控。以期阐明同源转录因子Nkx3.1与Her-2/neu表达、调控的内在联系，为临床防治激素抵抗前列腺癌提供研究基础。

去势抵抗性前列腺癌（castrate-resistant prostate cancer ; CRPC）治疗是世界性难题，目前尚无理想治疗方法。通过对CRPC发生机理进行探究及细胞生物学行为进行修饰的策略对CRPC治疗有潜在的临床意义。在本项研究中我们以CRPC为切入点，通过成熟的分子生物学技术，体外研究与临床组织样本相结合系统研究了Nx3.1与Her-2/neu之间调控关系。. 我们首先通过分子克隆技术合成Nkx3.1真核表达载体、RNA干扰载体及报告基因载体系列，上述载体通过测序、Nkx3.1体外表达及基因敲除等方式验证。我们收集前列腺癌临床样本，按照Gleason评分分类，采用组织微阵技术、荧光免疫技术分析不同组别Nx3.1及Her-2/neu表达，结果显示Nkx3.1表达随前列腺癌进展、恶性程度提高逐渐下降，而Her-2/neu表达逐渐增强。. 为了证实Nkx3.1是否为前列腺癌抑制因子，我们分析了Nx3.1表达对前列腺癌细胞活性的影响。LNCaP细胞敲除Nkx3.1基因后，MTT分析细胞增殖，结果显示Nkx3.1失表达后LNCaP细胞活性明显增强。Nkx3.1真核表达质粒转染LNCaP和PC3细胞，使上述细胞Nkx3.1表达或过表达，MTT分析细胞增殖，结果显示外源性恢复Nkx3.1表达后，前列腺癌细胞活性受到了明显抑制。.在上述基础上，我们进一步分析了前列腺癌细胞中Nx3.1表达对Her-2/neu影响。我们首先敲除LNCaP细胞中Nx3.1表达，western blot分析显示Nx3.1表达抑制后Her-2/neu表达明显增强。外源性恢复PC3细胞Nkx3.1表达后，Her-2/neu表达下降。上述结果显示Nkx3.1为前列腺癌抑制因子，Nkx3.1可抑制Her-2/neu表达，二者呈负向调控关系。. 为了进阐明上述调控关系的分子机理，我们对可能涉及信号通路变化进行了比较分析。通过western blot及蛋白定量分析显示，在激素抵抗前列腺癌PC3细胞中，恢复Nx3.1表达后可明显抑制p-Akt(S473)及NF-KB活性，结果表明Nkx3.1抑制Her-2/neu通过抑制PI3K/Akt/NFκB通路来实现。.我们的研究结果初步阐明了同源框转录因子Nkx3.1与Her-2/neu表达、调控的内在联系。