Endo-A机理研究

氮乙酰葡萄糖胺内切酶(ENGases),催化N-糖蛋白中糖链的水解。ENGase被分为两个家族，GH18和GH85家族。研究发现GH85家族具有转糖基活性，即一步将整个N-糖链转移到蛋白上。这在功能性糖蛋白和糖肽合成上意义重大。然而由于该家族酶至今没有晶体结构，对其催化机理仍然知之甚少,也影响了其应用。GH85家族ENGase均有超过600个氨基酸的蛋白，结晶困难。最早报道有转糖基活性并用于糖肽合成的Endo-A在发现的20年内都没有晶体结构解出。经过我们近几年的艰苦努力，最近终于得到了Endo-A的晶体结构，这也是GH85家族第一个晶体结构。Endo-A为空间四聚体，包含2400多个氨基酸，结构极为复杂。其单体包含三个结构域，其中两个目前功能未知。在此基础上，我们拟结晶Endo-A与多种底物和抑制剂的复合体，对其做深入详细的研究，阐明其作用机理，同时研究两个未知结构域的功能。