用芽孢杆菌自溶素构建细菌表面展示体系及锚定机制的研究

本研究拟从苏云金芽孢杆菌中扩增3个自溶素基因的细胞壁结合域的编码片断，分别与报告基因gfp组成3种不同的融合基因，研究这3种融合基因在乳酸乳球菌的诱导表达后细胞表面展示GFP活性和体外回向锚定活性，筛选具优化表面展示活性的自溶素片断。然后通过区域特异性突变技术、PCR介导的缺失突变与点突变技术，获得系列发生缺失突变和点突变的自溶素锚定片断，在与gfp构建成融合基因后，测定在乳酸乳球菌细胞外壁的GFP活性来初步确定自溶素锚定区域中的锚定活性成分，再通过将线性的优选自溶素基因片断与gfp的融合基因转化乳酸乳球菌，筛选发生染色体整合作用的重组展示菌，并考察融合蛋白的表达活性、定位活性、对体外pH条件、温度、蛋白酶作用的稳定性质及培养条件的影响，及表面展示外源蛋白对宿主菌的影响和进行小鼠急性动物实验，最终构建成一种实现稳定表达和细胞壁表面展示定位的、以及具有体外锚定性能的优化的细胞表面展示系统。