肿瘤坏死因子配体相关分子1A（TL1A）及其受体在寻常型银屑病发病中的作用及机制研究

This research is based on our previous findings: TNF-like ligand 1A (TL1A) levels were significantly elevated in both psoriatic skin lesions and serum in patients with psoriasis vulgaris (PV) and the high serum TL1A levels in patients with PV decreased after treatment. Besides, we found that soluble TL1A may synergize with IL-23 to stimulate peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from patients with PV to produce IL-17. So we speculate that TL1A may act as an important mediator of inflammation in PV. In this study, we observe the biologic effects of TL1A in PBMCs. We focus on the effects of TL1A on the production of proinflammatory cytokines at both mRNA and protein levels. Furthermore, we explore the potential contribution of TL1A receptors and signal transduction pathways in TL1A-treated PBMCs and mice. In addition, we also investigate the therapeutic effects of TL1A or its receptors blockade in the animal model of PV. It would be interesting and important to ascertain the effects and mechanisms of TL1A in PV both in vivo and in vitro. It may further extend and deepen the understanding of the biologic effects of TL1A and open new therapeutic opportunities in PV by targeting TL1A and its receptors. No similar study has been found so far.

本项目基于我们前期重要发现：肿瘤坏死因子样配体1A（TNF-like ligand 1A, TL1A）在寻常型银屑病（psoriasis vulgaris, PV）患者的皮损及血清中表达升高，并且随患者病情的好转而降低；TL1A能够协同IL-23刺激PV患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）产生IL-17。因此TL1A可能在银屑病的炎症反应中起到重要作用。拟深入研究：TL1A对人PBMCs促炎症性细胞因子在mRNA及蛋白水平产生的作用、可能依赖的受体和信号通路；阻断TL1A及其受体相互作用对PV小鼠模型的干预作用及机制。本项目从分子、细胞和动物等多个层面来揭示TL1A在PV发病中的作用，扩展我们对TL1A生物学作用的认识，为针对TL1A及其受体靶点治疗PV的新药开发及可能的产业化发展提供坚实的理论依据。未见国内外相关研究。

为进一步探讨TL1A及其受体DR3在银屑病中的作用，本研究主要从体外和体内两方面进行研究。在体外研究中，我们用流式细胞学分别检测寻常型银屑病患者、特应性皮炎患者及正常对照组外周血单个核细胞中DR3（+）的表达水平。我们发现：寻常型银屑病患者外周血单个核细胞中DR3（+）的表达水平较AD及正常人明显升高；但是没有发现AD与健康对照之间存在显著性差异。然后我们在抗炎治疗前后分别检测PV患者外周血单个核细胞亚群中DR3的表达，并与AD患者及正常对照组进行对比分析。我们发现，治疗前的寻常型银屑病患者外周血中DR3(+)CD8 (+)和CD14 (+)细胞比例较正常对照组及AD组明显升高；而寻常型银屑病患者外周血中DR3(+)CD4 (+) 和 CD19 (+)的细胞比例与正常对照组及AD组对比没有明显差异；抗炎治疗后寻常型银屑病患者外周血中DR3(+)CD8 (+)和CD14 (+)细胞比例较前明显降低。接下来我们分别分析了DR3(+)CD8 (+) 和 CD14 (+)细胞比例与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)评分之间的相关性，发现二者与PASI评分之间是正相关关系。体内研究发现局部TL1A皮内注射不会诱导正常的小鼠皮肤增殖，但能够加重咪喹莫特（imiquimod，IMQ）IMQ诱导的银屑病样小鼠皮肤的增殖，出现更严重的银屑病样皮损；同时促进局部炎症细胞浸润和相关标记CD3（+）T细胞、CD11c（+） DC细胞、MPO（+）中性粒细胞的表达；上调皮损处IL-17和IFN-γ mRNA的表达水平。我们给予IMQ诱导的银屑病样小鼠注射抗TL1A单克隆抗体后，发现抗TL1A单克隆抗体能够显著改善IMQ诱导的小鼠皮肤银屑病样皮损表现，组织学上也能够明显改善IMQ诱导的表皮增殖及炎细胞浸润，相关的标记CD3（+）T细胞、CD11c（+） DC细胞、MPO（+）中性粒细胞的表达也被明显抑制。此外，我们也发现抗TL1A单克隆抗体能够明显降低皮损处IL-17和IFN-γ mRNA的表达水平。因此，我们的研究进一步证实了TL1A/DR3参与了寻常型银屑病炎症的过程。TL1A能够通过CD8（+）淋巴细胞及CD14（+）单核细胞上的受体DR3发挥作用，促进免疫细胞的浸润，加重银屑病皮损的炎症反应。阻断TL1A能够显著的降低炎症反应，因此TL1A有望像TNFα一样成为寻常型银屑病新的治