基于实验性糖尿病大鼠视网膜蛋白质组学的中-维医结合特色方药作用机制研究

Chinese-Uygur combined medicine recipe (Tang Kang) of traditional Chinese medicine shows obivious ameliorate effect in clincal application on diabetic retinapathy(DR) patients for years. The gastrogavage of this recipe with STZ induced diabetic rats dsiplay it's protection of retinal microvessel , inhibition of oxidative stress and anti-inflammation effect. The recipe's sophisticated componants and multi-target activity make it complicated to resolve it's whole pharmcologic effects . The retina's rich of nurvous and vessel make it senstive to injury of high glucose , abnormal metabolism and endocrinosity of diabetes mellitus. We think the system proteomics changs may relate to it's pharmcologic effects. The comparetive proteomics study of retina may be a means of better strategy . So we plan to apply Tang Kang to STZ induced diabetic rats with experimental rat groups. Remove retina after left ventricle-right atrium saline perfusion following tail vein injection with Evans blue(EB)to assay the retina permeability . Preforming 2-D electrophoresis combined mass spectrum system to compare their whole proteomics changes and followed their identification and validation. By system bioinformatics analysis in the open internet resources , try to trace and investigate the Tang Kang recipe treatment resulting alteration of protein's systemic hemostasis of diabetic retina and to elucidate their pharmcologic significance. Serch the clues for futher establishment of objective multi-evalution plateform to develop this recipe's application a effective way of DR therapy.

中-维医结合方药“糖康”在临床中的应用，对糖尿病视网膜病变（DR）疗效显著，对STZ诱导的糖尿病大鼠模型显示出视网膜微血管保护、抑制氧化应激和炎症信号通路作用，但其成分、作用途径和靶点复杂。视网膜神经和血管高度丰富，是糖尿病最易累及的组织，它的蛋白质系统变化可能与该特色方药的作用有关，采用蛋白质组学方法进行研究是可能的解决策略。因而用分组设计以“糖康”干予STZ诱导的糖尿病大鼠模型，以伊文思蓝尾静脉注射，取左心室-右心耳灌流术后的大鼠视网膜组织测定渗透率，采用双向电泳-串联质谱平台对其视网膜蛋白质组学整体系统变化进行高重复性和稳定性的比较研究确证，结合前沿的生物信息学平台进行系统分析研究，力图追朔和探索该方药作用相关的视网膜组织蛋白质整体调控网络稳态变化的规律及其意义，为揭示其对糖尿病视网膜的作用机制提供线索，为新疆特殊的中-维医结合系统生物学研究探索思路和方法。

施今墨先生嫡传弟子祝谌予教授在继承治疗糖尿病经验的基础上，根据中医气血相关理论和标本同治原则和糖尿病慢性并发症出现时，血瘀临床特征显著的特点，结合自己的临床经验，总结出一张“益气养阴、活血化瘀”治疗糖尿病慢性并发症的有效方剂，本课题组以祝教授的方剂结合以2味新疆特色药材组方成“糖康”，临床应用显示可以改善血液流变性，预防和减少糖尿病视网膜病变的发生和发展。为促进传统有效复方的现代研究，本研究采用分组设计以"糖康"干予STZ诱导的糖尿病大鼠模型12周，以伊文思蓝作示踪剂测定视网膜渗透率。其余各组视网膜组织分别混合迅速液氮冻存后提取蛋白质，三组样品分别以8标iTRAQ试剂标记肽段（对照组2标、模型组3标、模型糖康干预组3标）上样以二维色谱分离后进行二级质谱分析，质谱数据检索RAT_uniprot_2015.8.18.fasta，设置ProteinPilot™进行分析，在得到的可分析蛋白的基础上得到对照组-模型组、模型组/模型糖康干预组的蛋白表达差异。结果发现①模型糖康干预组的大鼠血视网膜渗漏率显著高于对照组，但比模型组渗漏率低（ 18.69±0.242 ； 6.34±0.325 ， P<0.01 ： 18.69±0.242 ；28.49±0.742，P<0.05）。②模型组与模型组糖康干预组比较的上调蛋白32种；下调蛋白63种。未经验证的初步差异蛋白GO/KEEG分析显示，其涉及信号传导、氧化应激、免疫响应和糖、脂及氨基酸代谢等生物学过程。在此基础上后续的验证实验结果在最新生物信息学数据库平台上的分析有望解析糖康干预导致的糖尿病高血糖大鼠视网膜蛋白质网络稳态的扰动及其相关的生物学过程，为揭示传统中医“证候”的生物学基础和病理生理学过程提供线索，进而为阐明有效复方的作用机制和作用靶点提供药理学依据。结合其化学组分研究可以为研究开发有效、安全、质量可控的药物奠定基础。