角膜基质细胞异质性诱导Ⅰ型单纯疱疹病毒潜伏感染建立

HSV-1能否在角膜内建立潜伏感染，仍缺乏确凿的理论基础。本研究首次以"角膜基质细胞异质性"为契机，即角膜基质细胞并不是"终末分化纤维细胞"，而是"静止的神经前体细胞"，可能表达多种神经蛋白，进而提出此独创性论题。本研究拟1建立Balb/C小鼠HSK动物模型，分别利用免疫组化、Realtime PCR、Western等方法对HSV-1急性和潜伏感染过程中角膜基质细胞中神经标记分子的表达进行动态定量分析，找出与HSV-1潜感密切相关的特异性神经蛋白及其与HSV-1潜伏相关转录基因表达的时效关系。2 Balb/C小鼠角膜基质细胞体外培养，利用iRNA干扰技术阻断角膜基质细胞表达的特异性神经蛋白，观察HSV-1对角膜基质细胞易感性的变化，找出HSV-1潜感过程中该神经蛋白所介导的特异性信号识别通路。本研究将弥补国内外关于HSV-1在角膜内建立潜感的基础研究空白，进一步指导临床角膜移植术式的选择。

该课题实验充分证实了“角膜基质细胞异质性的特性”，在HSV-1急性和潜伏感染过程中角膜基质细胞会表达不同种类的神经标记分子包括tubulin、GFAP、vimentin、nestin，并在神经标记分子表达量方面与HSV-1潜伏感染过程具有密切的相关性变化。分别通过体内实验和体外实验证明HSV-1感染后不同时间点病变角膜中神经标记蛋白与HSV-1 DNA表达变化具有明显相关性，其中以Tubulin、GFAP变化最为明显。vimentin和TGFβ表达略有变化，但趋势并不明显。并在细胞水平进一步确定了神经标记分子GFAP在HSV-1角膜内潜伏感染过程中的重要作用，并与TGF-ß信号系统有关。对于晚变期病毒性角膜炎而致盲的患者进行角膜移植时，虽然眼部没有急性的炎症反应，但对严重的角膜混浊病变进行免疫组织化学检查时可见大量的HSV-1病毒抗原的阳性表达。考虑到临床上HSK复发型最为常见，分别提取病变角膜RNA，采用全基因组表达芯片技术检测HSV-1复发过程中的角膜细胞表达谱的变化，寻找到HSK由潜伏到复发过程中关键的因子，并初步确定参与复发的关键信号通路。分别筛查出在HSK发生过程中有多条信号通路开放，并伴有大量各类因子的产生，包括功能上调基因和下调基因。此项研究不但为HSV-1在角膜内建立潜伏感染提供了可靠的理论依据，而且对临床HSK发病机制的研究及预防均有极大地推动促进作用。该课题如期顺利完成。部分研究结果已发表，还有2~3篇相关内容文章已投稿并在审理过程中。