PglB介导的一步合成多糖－蛋白缀合物疫苗平台构建

多糖-蛋白缀合疫苗占目前使用的多糖疫苗的绝大多数。目前多糖－蛋白缀合疫苗生产多采用化学缀合方法，需要多步发酵和纯化过程，得率低，均一性差，成本高。本项目拟对最近才发现的细菌蛋白糖基化系统的寡糖基转移酶(PglB)进行研究，并将此系统和细菌脂多糖合成途径相偶联，最终构建一种新型、高效的多糖-蛋白缀合疫苗生产平台。本项目将以大肠杆菌O157：H7为研究模型，首先通过体外系统研究PglB对载体蛋白CRM197的底物适应性，并通过序列改造实现PglB对CRM197的一价和多价修饰，同时在模式宿主菌中构建细菌蛋白糖基化系统，利用此系统共表达O157:H7的O抗原多糖和载体蛋白CRM197，使其在宿主菌内缀合，从而建立PglB介导的多糖-蛋白缀合疫苗生产平台，实现通过一次发酵和纯化即可得到多糖－蛋白缀合疫苗的目的。此平台还可以扩展应用于其他病原菌的多糖-蛋白缀合物疫苗的生产。

根据PglB 底物特异性，对2种载体蛋白CRM197和大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)进行糖基化位点改造并完成了周质空间的表达。同时对宿主菌进行基因改造操作，将大肠杆菌O157:H7的O抗原合成基因簇转入宿主菌，实现特异O多糖的合成。在此基础上完成了 PglB的多糖-蛋白缀合疫苗平台的构建，对获得的多糖-蛋白缀合物进行检测。结果显示，CRM197和MBP均被糖基化。免疫实验发现多糖蛋白缀合物疫苗能够激起小鼠产生较高的抗O157的IgG抗体。同时发现多糖蛋白缀合物疫苗可活化Th1细胞，抑制Th2细胞活性。.以上结果表明我们已经成功构建O157的疫苗生产平台，并且此平台可以扩展应用于其他病原菌疫苗的生产。目前在学术刊物已经发表论文11篇，其中SCI文章9篇。整理好待投文章2篇。 培养硕士研究生6名（毕业3名），博士研究生2名。在该课题资助下，参加国际学术会议3次, 发表学术会议论文3篇。在国际国内形成了一定的影响，推动了相关科学研究的发展。