维医异常黏液质型阳痿病证大鼠模型的组织和血清蛋白质组学研究

Uighur medicine has shown a unique advantages in the diagnosis and treatments. Hilit is the core of medical theories of Uighur medicine, whereas Abnormal Hilit typing is the base of individual therapy combined with the diagnosis of whole body. Studies has shown that erectile dysfunction is a kind of disease mainly classified to Abnormal Belghem syndrome. In previous works, we have established Abnormal Belghem syndrom carrier rat model and Abnormal Savda type diease carrier rat model, reported marked changes in biological phenotype and function of reproduction,the profile related to gonad and Nitric oxide mediated signaling, and further confirmed the feasibility of animal modeling by treatment with a prescription of Uighur medicine. In this project,we will use the Abnormal Belghem or Abnormol Belghem type disease carrier rat model described above,to identify diffentially expressed protein profile in serum and penis smooth muscle cells of the animals before and after treatment with corresponding prescriptions by proteomics approach combined with informatics followed by characterization and verification of single candidate proteins with ELISA and immunohistochemistry. The aim of this study is to further understand the regulatory network of protein expression and signal transduction pathways specific to erectile function, identify serum and tissue specific protein markers and drug targets of Abnormal Belghem type erectile dysfunction in Uighur medicine, and reveal the mechanisms of the disease, to contribute for the development of Yimusake as a new drug as well as the modernization and standardization of the medical practice of Uighur medicine.

维吾尔医学（维医）对阳痿有独特的诊疗优势。体液论是维医诊疗的理论核心，而异常体液分型是辩证施治的基础。研究证明异常黏液质型阳痿是该疾病主要证型。前期工作中，我们通过异常黏液质证及其阳痿病证大鼠模型研究，发现其生殖生物学表征与功能、性腺轴相关指标及一氧化氮信号转导通路发生了明显改变，并经对证维药伊木萨克片干预，证明了该造模方法的科学性。故本研究拟利用以上证侯及病证大鼠模型，以对证方药干预，依托蛋白质双向电泳及液质联用质谱技术平台，通过血清和阴茎平滑肌组织的蛋白质组学筛查、信息学分析及差异蛋白指标的发现，并采用酶联免疫吸附和免疫组化方法对单一候选指标逐一验证，研究阴茎勃起功能相关的蛋白及信号转导调控网络，并建立该病证特异性血清和组织蛋白标志物体系，明确方药作用靶点，寻找维医异常黏液质阳痿病证的物质基础，为基于维药伊木萨克片的新药开发奠定基础，对于维医诊疗的标准化和现代化具有重要意义。

本研究在建立维医异常黏液质证候与阳痿病证大鼠模型基础上，结合伊木萨克片干预后，对模型生物学表征、阴茎勃起功能和性行为学改变进行动态观测，研究其内在变化规律，证实了模型的可靠性、科学性和可行性。随后，依托iITRQ/LC-MS-MS技术，对血清和阴茎平滑肌组织进行了蛋白质组学研究，血清中筛查出蛋白318种，组织中844种。结合维医理论，构建了血清和阴茎平滑肌组织候选蛋白标志物体系：异常黏液质证候(B1)和阳痿病证(A1)大鼠模型血清候选蛋白64、61种，伊木萨克片对证候(B3)和阳痿病证大鼠(A3)模型的血清药物靶点候选蛋白36、16种；组织候选蛋白B1和A1组30、 48种，靶点蛋白B3和A3组6、21种。IPA分析结果为，血清中B1组候选蛋白涉及的主要信号通路为急性期反应信号通路 、LXR/RXR 和FXR/RXR通路等；与ED相关蛋白质4种， 与糖尿病(DM)相关蛋白质12种，与肥胖（Obesity）相关蛋白质7种；A1组候选蛋白涉及的主要信号通路为急性炎症反应通路和LXR/RXR通路等，与ED相关蛋白质4种。组织中B1组候选蛋白涉及的主要信号通路为钙信号通路和细胞连接信号通路等，于ED相关蛋白质3种，与DM相关蛋白质2种，与Obesity 相关蛋白质1种，A1组候选蛋白涉及的主要信号通路为糖代谢通路和钙信号通路等，与ED相关蛋白质7种。以ELISA对血清中CRP、β2GP1、HPx等9种指标进行了验证，得出上述可作为该证候与阳痿病证及药物靶点的血清蛋白标志物，及构建的血清标志物体系成立；IHC法对组织中VDAC1、Parvalbumin、GSTα3等4种指标进行了验证，得出上述指标均可作为该证候与阳痿病证及药物靶点的组织蛋白标志物，及构建的组织标志物体系成立。综合分析，得出，炎症在异常黏液质证候与异常黏液质型阳痿病证的发生发展当中可能发挥着关键性的作用，而代谢功能异常或紊乱可能是该证候及其阳痿病证的核心机制之一，阴茎组织平滑肌纤维化和内皮功能改变可能是该阳痿病证效应器官的关键病理性因素与终极机制，而伊木萨克片治疗作用的实现与调整上述功能改变及调控上述相关蛋白有关，具体机制需进一步开展上述特异性蛋白整体网络调控关系的进一步深入研究。