雌激素诱导的细胞膜表面结合的雌激素受体α的动态变化和信号终止机制研究

雌激素是一种重要的内源性物质，通过雌激素受体(ER)的作用介导了许多重要的生理功能，其中细胞膜表面结合的雌激素受体(mER)介导了雌激素诱导的非基因组反应。如何有效区分mER和胞质内ER是目前研究mER非基因组作用的难点和瓶颈，限制了研究mER对雌激素等化学小分子刺激下在细胞膜和细胞质内的动态变化和信号传导终止机制。本项目采用细胞膜表面蛋白荧光技术，研究mER在细胞膜和细胞内的动态变化，探索mER激活信号途径的终止机制，通过分离mER的作用蛋白研究其信号传导机制，研究mER的翻译后修饰及其在mER功能中的作用。旨在建立实时动态检测荧光标记的膜蛋白在细胞内的动态变化的研究平台，发现mERα诱导的非基因组作用的终止机制，分离出新的与mERα作用的蛋白，初步阐明其作用机制，确定翻译后修饰在mERα功能中的作用。

雌激素是一种重要的内源性物质，通过雌激素受体（ER）的作用介导了许多重要的生理功能，其中细胞膜结合的雌激素受体（mER）介导了雌激素诱导的非基因组作用，如何有效区分mER和胞质内ER是目前研究mER非基因组作用的难点和瓶颈。此外，调控雌激素生物合成的关键酶芳香化酶表达和活性的作用机制还不清楚，对该问题的研究对进一步了解雌激素合成对mER介导的信号传导具有重要的意义。我们建立了基于磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶（PPTase）识别特异载体蛋白(CP)的方法，比较了不同CP识别肽(ybbR, A1 和S6)对PPTase的识别特异性，建立了体外标记体系，并成功实现了在不影响ERα功能的情况下，在其C末端融合A1标签，进行活细胞的生物素标记和荧光标记，这些研究为进一步研究mER的信号传导机制奠定了基础。我们同时建立了基于人卵巢颗粒KGN细胞和磁微粒雌激素检测的新方法，从中药安息香中分离到两个活性化合物龙胆二糖苷和龙胆三糖苷，可以通过变构效应调控芳香化酶的活性，在体内和体外促进雌激素的合成。我们通过对木犀草素的研究发现，木犀草素可以显著抑制KGN细胞的雌激素合成，其机制是通过降低KGN细胞内芳香化酶的转录和翻译，诱导芳香化酶的蛋白质降解。我们通过研究还发现常用中药淫羊藿的主要成分淫羊藿苷可以通过促进芳香化酶的表达，从而促进卵巢颗粒细胞和成骨细胞雌激素合成。这些研究为从不同角度进一步了解芳香化酶的表达调控机制，及其与mER介导的信号传导之间的相互交流奠定了基础，对进一步开发新的治疗乳腺癌和骨质疏松等雌激素相关疾病的药物具有重要的意义。