HRD1抵抗糖尿病视网膜病变的分子机制

Diabetic retinopathy (DR) is one of the main cause of blindness，some genetic factors play important roles in DR。The bulk of research on DR focused on the patients that easy to concurrent DR , looking for susceptibility genes of DR,Applicants focused on the patients had no complication of DR that suffered diabetes for a long time,condensed out of the ideas of the protect against genes to DR and to study.Previous studies have shown that endoplasmic reticulum stress-related factors play important roles in the resistance DR,this subject intends based on these results,lock the endoplasmic reticulum associated protein degradation (ERAD) factors HRD1 as a breakthrough,establish the animal model of diabetic rats,study the effects and pathways of the HRD1 protect against to the DR,and its synergy with P58IPK use the transgenic technology and RNAi technology.Culture of vascular endothelial cells and glial cells of retinal in vitro,further study the molecular mechanisms of the HRD1 protect against to DR from inflammatory cytokines 、vascular endothelial growth factor and endoplasmic reticulum stress .perfect the pathological mechanism of the DR.Look for the key protect against genes to the DR,to find the key targets for treatment of DR，used these genes to resist the occurrence and development of the DR,to protect the eyesight of patients with diabetes，and find a novel pathway for the treatment of the DR.

糖尿病视网膜病变(DR)是引起失明的主要原因之一,遗传因素在其中发挥重要作用，当前绝大部分研究集中在患糖尿病容易并发DR的患者，寻找DR易感基因，申请者将研究聚焦在患糖尿病很长时间却未并发DR的患者，凝炼出DR抵抗基因的思路，前期的研究显示内质网应激相关因子在抵抗DR中发挥重要作用，本课题拟根据前期结果，锁定内质网相关蛋白降解（ERAD）因子HRD1为突破口，建立糖尿病鼠动物模型，利用转基因和RNAi技术，研究HRD1抵抗DR 的效果和作用途径，以及它与P58IPK的协同作用，体外培养鼠视网膜血管内皮细胞和胶质细胞，从炎症因子、血管生长因子和内质网应激等途径进一步研究HRD1抵抗DR 的分子机制，完善和丰富DR的发生发展机制，寻找关键的DR抵抗基因,为治疗DR寻找到关键的靶点，利用这些基因抵抗DR的发生发展，保护糖尿病患者的视力，为治疗DR寻找到一个全新的途径。

背景：糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病的其中一个复杂的并发症，一些糖尿病人更容易发生糖尿病视网膜病变，而另外一些糖尿病人视网膜病变则非常轻微甚至没有。一些基因因子对于DR的发病起着至关重要的作用。这些因子可以抵抗糖尿病所带来了血管改变。我们收集了糖尿病病人的血液标本，这些病人中有些发生了DR，有些则没有发生。通过我们的分析，特别是基因芯片技术的检验结果证实，基因中含有编码SYVN1 基因可以抵抗DR。.实验内容及结果：.通过PCR技术我们可以确定SYVN1转基因的存在。将SYVN1转基因小鼠与普通小鼠比较，通过进行RT-PCR技术Western blotting技术发现转基因小鼠不管在mRNA表达还是蛋白质表达含量都增加了。当SYVN1过表达时，视网膜上的血管渗漏减少，ET-1这种血管损伤的基因标志物表达也减少了，视网膜血管的渗漏点减少了。比较FITC血管灌注造影视网膜铺片的结果，我们发现了SYVN1过表达的糖尿病小鼠比普通糖尿病小鼠渗漏明显减少，p＜0.01。同时ET-1含量显著减少，p＜0.01。SYVN1过表达糖尿病小鼠RGCs比普通鼠减少41.4%，糖尿病鼠比普通鼠RGCs减少74.4%。SYVN1过表达糖尿病小鼠比糖尿病小鼠RGCs多56.5%。结果显示SYVN1高表达可以阻止视网膜外核层RGCs凋亡。SYVN1糖尿病鼠TUNEL阳性细胞比糖尿病鼠显著减少19%，p＜0.05..意义与展望：.不同信号通路的联系尚未明朗，值得进一步研究。并且，我们发现转基因鼠与普通鼠之间NF-κB、CHOP、GRP48表达水平不同。这也提示我们不同的信号通路可以相互影响。因此目的基因的高表达可以影响这些信号通路。