miR-365下调Müller细胞中timp3表达参与糖网病早期病变

糖尿病视网膜病变（简称"糖网病"）是全球性最主要致盲眼病，致病机制至今未明。Müller细胞活化导致新生血管和纤维化，在糖网病发病起重要作用，但是miRNA水平调控Müller相关因子表达未见报道。我们前期研究构建了氧化应激条件下Müller细胞来源的小分子RNA文库，发现miR-365表达上调。体外荧光素酶实验验证其与timp3基因相互作用。Timp3 在视网膜色素上皮层表达，但未见报道miR-365与timp3在Müller细胞表达和作用。.本项目拟在Müller细胞研究miR-365靶向下调timp3表达及对Müller细胞信号通路和活化状态的影响，进一步在动物模型研究miR-365和timp3在早期糖网病时程变化，并选取miR-365高表达时间点进行干预。结果有助于揭示miR-365作为调控分子影响Müller细胞功能参与早期糖网病的机制，探索应用miRNA分子改善糖网病的可能性。

糖尿病视网膜病变（简称“糖网病”）是全球性最主要致盲眼病，致病机制至今未明。氧化应激和Müller 细胞活化在糖网病发病起重要作用。我们的研究目的是氧化应激状态下Müller细胞的表观遗传学改变，以此为靶点治疗糖网病。我们用乙二醛(Glyoxal)体外处理Müller细胞(glyoxal-rMC-1)构建了氧化应激条件下Müller 细胞来源的小分子RNA 文库，发现miRNA-365 表达上调。利用定量PCR和原位杂交(ISH)的方法证明了miRNA-365在大鼠和小鼠的视网膜有表达，主要集中在内核层(INL)和色素上皮层(RPE)。通过生物信息学分析并体外荧光素酶实验验证miRNA-365与timp3 基因相互作用。在乙二醛(Glyoxal)体外处理的Müller细胞中，miRNA-365表达量上调而靶基因timp3相应的表达量下调。在STZ处理构建的大鼠模型中研究miRNA-365 和timp3时程变化，结果发现发病2周后，视网膜中 miRNA-365 表达大幅度升高，与此同时Timp3 表达量下降。在动物模型选取miRNA-365 高表达时间点进行干预，通过视网膜下腔注射和玻璃体腔注射将慢病毒介导的anti-miRNA-365注射到视网膜组织。在治疗后1周，2周，4周，6周对大鼠的视功能和视网膜形态结构进行检测，除此还检测了氧化应激指标和炎症因子。研究结果发现，以慢病毒载体处理的对照眼睛为对照，干预后1周miRNA-365表达量开始出现下调，其靶基因timp3从干预后2周开始表达量回升。通过电生理检测(ERG)治疗后大鼠视网膜功能得到恢复。Müller细胞胶质化得到缓解。STZ处理6周后检测抗氧化酶的含量或活性大量降低，但是在anti-miRNA-365治疗后得到恢复。该项目研究结果揭示miRNA-365 作为调控分子影响Müller 细胞功能参与氧化应激的机制。miRNA分子作为潜在临床治疗靶点还有待进一步研究。.本课题研究期间共发表相关SCI科研论文3篇（其中第一作者论文1篇），但是都没有标注基金号。最近撰写文章投稿Glia期刊，目前尚在审稿中。该文章标注基金号。指导1名硕士研究生参与本课题的研究工作。积极多次参加国内外学术会议和交流。