Estrogen/NDRG2/Na+/K+-ATPase调控通路在唾液生成和雌激素缺乏诱发口干症中的作用研究

绝经后女性易发口干症，与雌激素分泌减少有关，但具体分子机制不明。雌激素可以调节Na+/K+-ATPase，而Na+/K+-ATPase是介导唾液离子重吸收的关键分子。但是雌激素调控Na+/K+-ATPase的详细机制尚不清楚。我们前期研究发现：雌激素能上调NDRG2表达；NDRG2在唾液腺导管细胞高表达；酵母双杂交筛选到Na+/K+-ATPase β1是NDRG2的相互作用分子。上述结果提示NDRG2可能是雌激素和Na+/K+-ATPase的中介分子，并可能参与唾液生成和雌激素缺乏诱发的口干症。本项目拟通过体外细胞水平的研究和去卵巢大鼠模型，分析是否存在Estrogen/NDRG2/Na+/K+-ATPase调控通路，以及该通路在唾液生成和雌激素缺乏诱发口干症中的作用。本课题可为研究唾液生成的分子机制提供新的线索，为绝经后女性口干症的发病机制及治疗提供新的思路和理论依据。

NDRG2是第四军医大学生化教研室药立波教授课题组于1999年发现并首先克隆的人源化基因。我们发现NDRG2在人和大鼠的唾液腺导管细胞中特异表达，而导管细胞的重要功能是进行唾液的离子重吸收，从而使正常唾液渗透压维持在血浆渗透压的1/9。绝经后女性口干症的发生率在50%以上，大部分口干症患者并没有绝对的唾液流量的减少，而主要是唾液成分的改变，特别是渗透压的增高。本课题主要有两个重要发现：第一、唾液腺导管细胞中存在Estrogen/NDRG2/Na+/K+-ATPase调控通路；第二、NDRG2治疗可以改善雌激素缺乏诱发的口干症。.第一个重要发现获得的关键数据包括：通过经典的三种研究转录调控的方法（报告基因、EMSA、CHIP），证实NDRG2是雌激素的下游靶基因；利用免疫共沉淀和激光共聚焦共定位，证实NDRG2和Na+/K+-ATPase beta亚基的相互作用；体外transwell-col模型，发现NDRG2能促进唾液腺导管细胞对Na+和Cl-的重吸收；NDRG2通过与Na+/K+-ATPase beta亚基的相互作用，抑制后者通过泛素-蛋白酶体途径降解；NDRG2参与雌激素对Na+/K+-ATPase的调节。.第二个重要发现获得的关键数据包括：通过去卵巢手术，建立雌激素缺乏诱导的口干症模型，动物的唾液流量没有显著地变化，而唾液中Na+和Cl-的浓度显著升高，去势动物饮水量明显增多；去卵巢大鼠颌下腺NDRG2、Na+/K+-ATPase β1和ENaC蛋白水平均明显降低，而Na+/K+-ATPase β1在mRNA水平没有明显变化；给予去势大鼠两种NDRG2腺病毒治疗（CMV启动子和KALL启动子），使NDRG2分别非特异性在唾液腺组织和特异性在唾液腺导管细胞表达，两者均能减少唾液中Na+和Cl-的浓度，恢复去势大鼠的正常饮水量；原代培养给与治疗的大鼠唾液腺导管细胞，发现NDRG2治疗组能恢复导管细胞对Na+的重吸收和Na+/K+-ATPase介导的Na+外向电流。.本课题的研究在生理水平部分阐明了唾液离子重吸收的分子机制，拓展了NDRG2分子的功能研究，为临床绝经后女性口干症的治疗奠定了研究基础，有望在特定阶段阻断雌激素缺乏诱发的口干症。